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外泌体提取纯化试剂盒(血清-血浆)  Cite:0    分享

货号: FU0005
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  • 用途:60T可以提取60ml
规格:
2T 30T 60T
单位:
单价:¥450.00
产品简介
产品组成
操作步骤(仅供参考)
注意事项
产品简介

外泌体是由细胞分泌的包含 RNA 和蛋白质的小囊泡(30-150 nm),在血液、唾液、尿液及乳汁等体液中大量存在。外泌体被认为具有细胞间信使的功能,在特定细胞之间传递它们的效应物或信号分子;然而其构造、效应物组成以及所参与的生物学通路目前尚不明晰。
外泌体的生物学功能研究中需要分离完整的外泌体颗粒,而传统超速离心方法步骤繁琐、硬件要求高、操作难度大。本品外泌体提取纯化试剂盒,组分经过优化处理,适用于血清、血浆中的外泌体提取,并搭配纯化过滤装置,可快速高效地获得高纯度外泌体颗粒,可用于电镜分析、NTA 粒径分析、核酸分析、蛋白分析、细胞学实验和动物实验等。

产品组成
组分2T30T60T
Blood PureExoSolution(BPS)*2 mL30 mL60 mL
ExosomePurification Filter*2Tubes30Tubes60Tubes

* Nuclease-free, Sterile

操作步骤(仅供参考)

自备材料
高速离心机,涡旋振荡器,1.5 mL 离心管,1×PBS 缓冲液(无菌)
操作步骤(仅供参考)
一、 样品预处理
1. 取样:如果是冻存样品,从冰箱取出后于 25℃水浴中进行解冻,将完全融化后的样品置于冰上,如果是新鲜样品,收集样品后置于冰上;
2. 样品初始用量:单次提取时的样品量建议血清、血浆不低于 200 μL;
3. 离心去细胞碎片:将样品转移至离心管中,于 4℃以3,000 ×g(~6,200 rpm*)离心 10 min,去除样品中的细胞碎片(注:若沉淀较多,可 3,000 ×g,10 min离心多次至无明显沉淀,每次取离心上清液);*为约7 cm有效离心半径的小离心机换算(≤2 mL离心管),下同。
4. 离心去杂质碎片:将离心上清液转移至新的离心管中,于 4℃以 12,000 ×g(~12,400 rpm)离心 10 min,去除样品中的杂质碎片;
5. 上清液转移:去除杂质碎片的上清液转移到新离心管中。
二、 提取外泌体
1. 上清液预处理:在去除杂质的离心上清液中先加入预冷的 1×PBS 进行稀释,再加入 Blood PureExo Solution(BPS)试剂,具体的加入剂量如下(其他剂量请根据表中的用量等比例换算):

样品名称样品剂量PBS 剂量BPS 剂量
血清 0.25 mL 0.75 mL 0.25 mL
血浆0.25 mL 0.75 mL0.25 mL

2. 溶液混合:加入 BPS 试剂后将离心管盖紧,通过涡旋振荡器混匀 1 min,再放置于 4℃静置 30 min 以上(注:增加静置时间可提高外泌体得率,但不可超过 24 h);
3. 沉淀外泌体:取出装有混合液的离心管于 4℃以 12,000×g(~12,400 rpm)离心 15 min,弃上清,沉淀中富含外泌体颗粒(注:尽可能吸尽上清液);
4. 再次离心:将含有沉淀的离心管再次于 4℃以 12,000×g(~12,400 rpm)离心 2 min,弃上清,以便去除管壁残留液体(注:尽可能吸尽上清液);
5. 外泌体重悬:取合适量的 1×PBS 均匀吹打离心沉淀物,待其溶解后,将重悬液转移至新的 1.5 mL 离心管中(建议每 0.25 mL 血清血浆用 200 μL 左右 1×PBS 重悬);
6. 收获外泌体颗粒:将含有重悬液的1.5 mL 离心管于4℃以 12,000 ×g(~12,400 rpm)离心 2 min,保留上清液,其中富含外泌体颗粒(注:若沉淀较多,可 12,000×g,2 min 离心多次至无明显沉淀,每次取上清液)。
三、 纯化外泌体
1. 纯化外泌体:将收获的外泌体颗粒粗品转入 ExosomePurification Filter(EPF 柱)上室中,于 4℃以 3,000×g(~6,200 rpm)离心 10 min,离心后收集 EPF 柱管底的液体,此液体即为纯化后的外泌体颗粒(注:EPF柱不可重复使用);
2. 外泌体的保存:纯化后的外泌体以合适体积进行分装冻存于-80℃低温冰箱中,以备后续实验使用。

注意事项

1. 我司生产的生化试剂如无特殊标注,基本为非无菌包装,若用于细胞实验,请提前做好预处理。需低温保存的产品,一旦配成溶液,请分装保存,避免反复冻融造成的产品失效。
2. 本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床诊断或治疗,食品及化妆品等用途。请勿存放于普通住宅区。

3. 为了您的安全和健康,请穿好实验服并佩戴一次性手套和口罩操作。

4. 实验结果可由多种因素影响,相关处理只限于产品本身,不涉及其他赔偿。

 

备注:由于产品信息可能会有优化升级。请以实际收货标签信息为准。

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