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斑马鱼产品
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基本信息-
产品名称外泌体提取纯化试剂盒(通用型)
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保存温度室温
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有效期2年
产品简介外泌体是由细胞分泌的包含 RNA 和蛋白质的小囊泡（30-150 nm），在血液、唾液、尿液及乳汁等体液中大量存在。外泌体被认为具有细胞间信使的功能，在特定细胞之间传递它们的效应物或信号分子；然而其构造、效应物组成以及所参与的生物学通路目前尚不明晰。
外泌体的生物学功能研究中需要分离完整的外泌体颗粒，而传统超速离心方法步骤繁琐、硬件要求高、操作难度大。本品外泌体提取纯化试剂盒，组分经过优化处理，适用于细胞培养上清液、血清血浆中的外泌体提取，并搭配纯化过滤装置，可快速高效地获得高纯度外泌体颗粒，可用于电镜分析、NTA 粒径分析、核酸分析、蛋白分析、细胞学实验和动物实验等。
产品组成| 组分 | 5T | 20T |
| Exosome Concentration Solution* | 30 mL | 120 mL |
| Exosome Purification Filter* | 5 Tubes | 20 Tubes |
* Nuclease-free, Sterile
操作步骤（仅供参考）自备材料
高速离心机，涡旋振荡器，50 mL 离心管，1.5 mL 离心管，1×PBS 缓冲液（无菌）
操作步骤（仅供参考）
一、 样品预处理
1. 取样：如果是冻存样品，从冰箱取出后于 25℃水浴中进行解冻，将完全融化后的样品置于冰上，如果是新鲜样品，收集样品后置于冰上；
2. 样品初始用量：单次提取时的样品量建议细胞培养上清液不低于 20 mL，血清/血浆不低于 0.5 mL；
3. 离心去细胞碎片：将样品转移至离心管中，于 4℃以3,000 ×g（~6,200 rpm*/~5,200 rpm**）离心 10 min，去除样品中的细胞碎片（注：若沉淀较多，可 3,000 ×g，10 min 离心多次至无明显沉淀，每次取离心上清液）；*为约7 cm有效离心半径的小离心机换算（≤2 mL离心管），下同。**为约10 cm有效离心半径的大离心机换算（≥15 mL离心管），下同。
4. 离心去杂质碎片：将离心上清液转移至新的离心管中，于 4℃以 10,000 ×g（~11,300 rpm*/~9,500 rpm**）离心 10 min，去除样品中的杂质碎片；
5. 上清液转移：去除杂质碎片的上清液转移到新离心管中。
二、 提取外泌体
1. 上清液预处理：在去除杂质的离心上清液中加入Exosome Concentration Solution（ECS 试剂），部分较为粘稠的样品（血清、血浆等），需先加入预冷的1×PBS 进行稀释，然后再加入 ECS 试剂，具体的加入剂量如下（其他剂量请根据表中的用量等比例换算）：
| 样品名称 | 样品剂量 | PBS 剂量 | ECS 剂量 |
| 细胞上清 | 20 mL | - | 5 mL |
| 血清/血浆 | 0.25 mL | 0.75 mL | 0.25 mL |
2. 溶液混合：加入 ECS 试剂后将离心管盖紧，通过涡旋振荡器混匀 1 min，再放置于 4℃静置８ h 以上（注：增加静置时间可提高外泌体得率，但不可超过 24 h）；
3. 沉淀外泌体：取出装有混合液的离心管于 4℃以 10,000×g（~11,300 rpm*/~9,500 rpm**）离心 60 min，弃上清，沉淀中富含外泌体颗粒（尽可能吸尽上清液）；
4. 再次离心：将含有沉淀的离心管再次于 4℃以 10,000×g（~11,300 rpm*/~9,500 rpm**）离心 2 min，弃上清（注：尽可能吸尽上清液）；
5. 外泌体重悬：取合适量的 1×PBS 均匀吹打离心沉淀物，待其溶解后，将重悬液转移至新的 1.5 mL 离心管中（建议每 20 mL 细胞培养上清液或 0.25 mL 血清/血浆用200 μL 左右 1×PBS 重悬）；
6. 收获外泌体颗粒：将含有重悬液的1.5 mL 离心管于4℃以 12,000 ×g（~12,400 rpm*）离心 2 min，保留上清液，其中富含外泌体颗粒（注：若沉淀较多，可 12,000×g，2 min 离心多次至无明显沉淀，每次取上清液）。
三、 纯化外泌体
1. 纯化外泌体：将收获的外泌体颗粒粗品转入 ExosomePurification Filter（EPF 柱）上室中，于 4℃以 3,000×g（~6,200 rpm*）离心 10 min，离心后收集 EPF柱管底的液体，此液体即为纯化后的外泌体颗粒（注：EPF 柱不可重复使用）；
2. 外泌体的保存：纯化后的外泌体以合适体积进行分装冻存于-80℃低温冰箱中，以备后续实验使用。
注意事项1. 我司生产的生化试剂如无特殊标注，基本为非无菌包装，若用于细胞实验，请提前做好预处理。需低温保存的产品，一旦配成溶液，请分装保存，避免反复冻融造成的产品失效。
2. 本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床诊断或治疗，食品及化妆品等用途。请勿存放于普通住宅区。
3. 为了您的安全和健康，请穿好实验服并佩戴一次性手套和口罩操作。
4. 实验结果可由多种因素影响，相关处理只限于产品本身，不涉及其他赔偿。
备注：由于产品信息可能会有优化升级。请以实际收货标签信息为准。
