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斑马鱼产品
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基本信息-
产品名称外泌体提取试剂盒(乳液)
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保存温度室温
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有效期2年
产品简介外泌体是由细胞分泌的包含 RNA 和蛋白质的小囊泡（30-150 nm），在血液、唾液、尿液及乳汁等体液中大量存在。外泌体被认为具有细胞间信使的功能，在特定细胞之间传递它们的效应物或信号分子；然而其构造、效应物组成以及所参与的生物学通路目前尚不明晰。
外泌体的生物学功能研究中需要分离完整的外泌体颗粒，而传统超速离心方法步骤繁琐、硬件要求高、操作难度大。本品外泌体提取试剂盒，组分经过优化处理，适用于乳液中的外泌体提取，可快速高效地获得外泌体颗粒，可用于电镜分析、NTA 粒径分析、核酸分析、蛋白分析、细胞学实验和动物实验等。
产品组成| 组分 | 2T | 20T |
| Solution A* | 5 mL | 50 mL |
| Solution B* | 6 mL | 60 mL |
| Solution C* | 6 mL | 60 mL |
| Solution D* | 12 mL | 120 mL |
| 50 mL 离心过滤柱 | 2 个 | 20 个 |
* Nuclease-free, Sterile
操作步骤（仅供参考）自备材料
高速离心机，涡旋振荡器，50 mL 离心管，1.5 mL 离心管，1×PBS 缓冲液（无菌）
操作步骤（仅供参考）
一、 样品预处理
1. 取样：如果是冻存样品，从冰箱取出后于 25℃水浴中进行解冻，将完全融化后的样品置于冰上，如果是新鲜样品，收集样品后置于冰上；
2. 样品初始用量：单次提取时的乳液量建议不低于 25 mL；
3. 离心去脂：将样品转移至离心管中，于4℃以10,000 ×g（~9,500 rpm**）离心 20 min，去除样品中的脂质及部分蛋白（注：离心后样品分为三层，上层为脂质层，下层为蛋白沉淀，中间层为乳清。离心后上层状态为“致密、稳定、不易脱落”，若上层“松软、易脱落”且下层沉淀较多，可重复此步骤，每次离心取中间层液体）；**为约10 cm有效离心半径的大离心机换算（≥15 mL离心管），下同。
4、 乳清转移：将去除脂质的乳清（中间层液体）转移至新的 50 mL 离心管中（注：可用枪头将上层脂质戳破后缓慢倾倒，或用移液器转移，转移后的乳清中带有少量脂质和沉淀是正常现象，不影响后续实验）。
二、 去除杂蛋白
1. 乳清澄清：乳清中加入 Solution A，将离心管颠倒混匀至呈现“半透明状”，再加入 Solution B，颠倒混匀后于 2℃至 8℃静置 10 min；（注：静置完成后轻轻晃动离心管，呈现“豆花状”固体，液体部分为“透明状”。若未呈现“豆花状”或样品仍为“乳白色”，可再适当加入 Solution B 至液体为“透明状”）；
| 乳清体积 | Solution A 剂量 | Solution B 剂量 |
| 20 mL | 2 mL | 2.5 mL |
注：具体加入量根据乳清体积按上表等比例换算2、 离心去蛋白：将澄清后的乳清于 4℃以 10,000 ×g（~9,500 rpm**）离心 10 min，收集上清液；
3. 上清液过滤：将收集的上清液转移至 50 mL 离心过滤柱中，于 4℃以 5200 rpm（~3000 ×g）离心 2 min(注：若未过滤完全，可重复此步骤。50 mL 离心过滤柱为一次性耗材，不建议重复使用)；
4. 将过滤后的上清液转移至新离心管中，加入 Solution C后颠倒混匀（注：Solution C 加入剂量和 Solution B剂量保持一致）。
三、 提取外泌体
1. 上清液预处理：在加入 Solution C 后的上清液中加入Solution D，具体加入剂量如下（其他剂量请根据表中的用量等比例换算）：
| 样品名称 | 样品剂量 | 加入 Solution D 剂量 |
| 乳清 | 20 mL | 5 mL |
2. 溶液混合：加入 Solution D 后将离心管盖紧，通过涡旋振荡器混匀 1 min，再放置于 4℃静置 1 h 以上（注：增加静置时间可提高外泌体得率，但不可超过 24 h）；
3. 沉淀外泌体：取出装有混合液的离心管于 4℃以 10,000×g（~9,500 rpm**）离心 60 min，弃上清，沉淀中富含外泌体颗粒（注：尽可能吸尽上清液）；
4. 再次离心：将含有沉淀的离心管再次于 4℃以 10,000×g（~9,500 rpm**）离心 2 min，弃上清（注：尽可能吸尽上清液）；
5. 外泌体重悬：取合适量的 1×PBS 均匀吹打离心沉淀物，待其溶解后，将重悬液转移至新的 1.5 mL 离心管中（建议每 25 mL 乳液用 200 μL 左右 1×PBS 重悬）；
6. 收获外泌体颗粒：将含有重悬液的1.5 mL 离心管于4℃以 12,000 ×g（~12,400 rpm*）离心 2 min，保留上清液，其中富含外泌体颗粒（注：若沉淀较多，可 12,000×g，2 min 离心多次至无明显沉淀，每次取上清液，外泌体溶液可能带有淡淡的乳白色，此为正常现象）。*为约 7 cm 有效离心半径的小离心机换算（≤2 mL 离心管）。
7. 外泌体的保存：纯化后的外泌体以合适体积进行分装冻存于-80℃低温冰箱中，以备后续实验使用。
注意事项1. 我司生产的生化试剂如无特殊标注，基本为非无菌包装，若用于细胞实验，请提前做好预处理。需低温保存的产品，一旦配成溶液，请分装保存，避免反复冻融造成的产品失效。
2. 本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床诊断或治疗，食品及化妆品等用途。请勿存放于普通住宅区。
3. 为了您的安全和健康，请穿好实验服并佩戴一次性手套和口罩操作。
4. 实验结果可由多种因素影响，相关处理只限于产品本身，不涉及其他赔偿。
备注：由于产品信息可能会有优化升级。请以实际收货标签信息为准。
