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AO/PI双染试剂盒  Cite:0    分享

货号: SQ1117
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规格:
100T
单位:
单价:¥400.00
产品简介
产品组成
适用样本
使用方法(仅供参考)
储存与保存
注意事项
产品简介

萨默斯® Summus® AO/PI双染细胞凋亡检测试剂盒是采用AO/PI探针双染细胞核的方法检测凋亡细胞的状态,是细胞凋亡形态学研究常用的染色方法。
吖啶橙(Acridine Orange,AO)为一种具有细胞膜通透性的荧光染料,该染料能透过活细胞膜,使核DNA和RNA染色。它与细胞中DNA和RNA结合量存在差别,复合物可发出不同颜色的荧光,AO与dsDNA结合时发出绿色荧光,而与ssDNA和RNA结合时发出红色荧光。当与DNA结合时,它与荧光素在光谱上非常相似,激发最大值为502nm,发射最大值为525nm(绿色)。当它与RNA结合时,激发最大值移至460nm(蓝色),发射最大值移至650nm(红色)
在荧光显微镜下观察,吖啶橙可透过正常细胞膜,使细胞核呈绿色或黄绿色均匀荧光;而在凋亡细胞中,因染色质固缩或断裂为大小不等的片断,形成凋亡小体。吖啶橙使其染上致密浓染的黄绿色荧光,或黄绿色碎片颗粒;而坏死细胞黄荧光减弱甚至消失。
Propidium Iodide是一种DNA结合性染料,其激发和发射波长分别为488nm和630nm,产生红色荧光,但无膜通透性,不能透过活细胞膜,只能染死细胞。因此,在荧光显微镜下观察,正常细胞不能着色,早期凋亡细胞呈微弱红光,晚期凋亡细胞红光加强,坏死细胞呈强红色荧光。

产品组成
产品组成100T组分编号储存条件
1.组分A:AO染色液

500μL

SQ1117A2~8℃避光
2.组分2:PI染色液1000μLSQ1117B2~8℃避光
3.组分C:试剂C10mLSQ1117C2~8℃避光


适用样本

1.悬浮细胞
2.贴壁细胞

使用方法(仅供参考)

耗材准备

1.离心管
2.吸头
3.一次性手套

试剂准备

1.PBS 缓冲液(pH7.4,实验室常用的10mM磷酸缓冲盐溶液(1X))
2.或者HBSS(Hank's Balanced Salt Solution)

染色工作液配制:
1. 根据样品数,按下列比例配制染色缓冲液。 取100μL试剂C用900μL纯水稀释,充分混匀即成染色缓冲液。
2. 每500μL 染色缓冲液加入5ul AO染色液和10ul PI染色液,充分混匀,即成染色工作液。

悬浮细胞染色
1. 收集样本细胞,细胞数量在10X105个以内。
2. 用PBS洗涤细胞两次。
3. 用500μL 染色工作液将细胞重悬。
4. 轻轻混匀后4℃避光孵育10-20分钟。
5. 用PBS洗涤细胞。
6. 用荧光显微镜或流式细胞仪检测结果。

贴壁细胞原位染色:
1. 用PBS洗涤细胞2次。
2. 细胞培养板中或细胞爬片上加入适量体积的染色工作液。
3. 37 ℃孵育细胞 10~20分钟,不同的细胞最佳培养时间不同。可以用20分钟作为起始孵育时间,之后优化体系以得到均一的标记结果。
4. 吸干染色工作液,用培养基洗培养板或盖玻片2~3次,每次用预热的培养基覆盖所有细胞,然后吸干培养基。

结果分析:
在荧光显微镜下,选用488nm激发光镜检:
AO染色正常细胞DNA呈均匀黄色或黄绿色,形态结构正常。
当细胞凋亡时,染色质浓缩,细胞核碎裂成点状,被染成大小不一、致密浓染。
坏死细胞呈强红色荧光。

储存与保存

1.保存:2-8℃,避光
2.有效期:6个月

注意事项

1.螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心,将盖内壁上的液体收集至管底,避免开盖时液体洒落。
2.细胞处理需要小心操作,尽量避免人为的损伤细胞。
3.本染色试剂盒可用于细胞、细胞涂片等。以下以悬浮培养细胞的荧光显微镜检测为例,其他方法请参阅相关资料。
4.贴壁细胞可以消化下来染色,也可以直接原位染色。

5.我司生产的生化试剂如无特殊标注,基本为非无菌包装,若用于细胞实验,请提前做好预处理。需低温保存的产品,一旦配成溶液,请分装保存,避免反复冻融造成的产品失效。

6.本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床诊断或治疗,食品及化妆品等用途。请勿存放于普通住宅区。 

7.为了您的安全和健康,请穿好实验服并佩戴一次性手套和口罩操作。 

8.实验结果可由多种因素影响,相关处理只限于产品本身,不涉及其他赔偿。 

 

备注:由于产品信息可能会有优化升级,请以实际收货标签信息为准。

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