Flag 标签是由 8 个氨基酸组成的多肽片段 DYKDDDDK，常用形式有 Flag 和 3× Flag。
Summus Anti-Flag 琼脂糖磁珠由高品质的 Flag 抗体与琼脂糖磁珠共价偶联制成，具有高载量、高特异性和性质稳定等特点，可用于检测和纯化 Flag 融合表达蛋白，也可用于免疫沉淀 (IP) 实验。

推荐缓冲液（自备）
平衡/洗涤缓冲液：50 mM Tris, 0.15 M NaCl, pH 7.4
洗脱缓冲液 Ⅰ：0.1 M Glycine, pH 3.0
洗脱缓冲液 Ⅱ：50 mM Tris, 0.15 M NaCl, 100-500 μg/mL Flag Peptide, pH 7.4
中和缓冲液：1 M Tris-HCl, pH 8.0
储存缓冲液：1× PBS, 0.02% NaN3
注：所有缓冲液建议用超纯水配制，且配制后通过 0.45 μm 或 0.22 μm 滤膜过滤除菌。
操作步骤（仅供参考）
蛋白纯化
样品在纯化前建议离心或用 0.22 μm 或 0.45 μm 滤膜过滤，减少杂质，提高蛋白纯化效率。
1. 磁珠预处理
1) 充分混匀琼脂糖磁珠，依照所需纯化的样品量，取适量 Anti-Flag 琼脂糖磁珠混悬液加入离心管中，置于磁性分离器上，磁性分离 1 min，弃上清。
2) 加入与悬浮液体积相同的的平衡缓冲液，用移液器反复吹打 5 次以上使其充分混匀，磁性分离 1 min，弃上清，重复 2-3 次。
2. 样品结合
加入样品，封闭离心管，置于混匀仪上 4 C 孵育 1-2 h 或室温孵育 0.5-1 h（具体孵育时间可根据结合效果调整）。
3. 洗涤
孵育完成后，磁性分离 1 min，取出上清（上清可保留作为流穿液，用于电泳鉴定）。使用 5 倍磁珠体积的洗涤缓冲液清洗，磁性分离 1 min，弃上清，重复 3-5 次。
注：最后一次洗涤更换新离心管。
4. 提供两种洗脱方案，可根据需要选择不同的洗脱方案。
1) 酸性洗脱：此方法洗脱的样品保持原有生物活性，可用于后期功能分析。
使用 3-5 倍磁珠体积的洗脱缓冲液Ⅰ进行洗脱，用移液器反复吹打 5 次以上使其充分混匀，置于混匀仪上室温孵育 5-10 min，磁性分离 1 min，收集上清液并立即用中和液缓冲液中和 pH （总洗脱液体积的 1/10），样品可用于后期功能分析。可重复 2-3 次并分别收集上清液。
注：
a. 酸性洗脱后磁珠要立即用结合缓冲液平衡，Anti-Flag 琼脂糖磁珠在洗脱液中不要超过 20 min。
b. 洗脱后蛋白短期可 4℃ 存放，若要长期存放建议置于 -20℃ 中。
2) 竞争性洗脱：此方法洗脱的样品保持原有生物活性，可用于后期功能分析。
使用 3-5 倍磁珠体积的洗脱缓冲液Ⅱ进行洗脱，用移液器反复吹打 5 次以上使其充分混匀，置于混匀仪上 4℃ 孵育 30 min，磁性分离 1 min，收集上清液即为目标蛋白。
注：洗脱后蛋白短期可 4℃ 存放，若要长期存放建议置于 -20℃ 中。
免疫沉淀/免疫共沉淀
1. 磁珠预处理
1) 取适量 Anti- Flag 琼脂糖磁珠混悬液加入离心管中，置于磁性分离器上，磁性分离 1 min，弃上清。
2) 加入与悬浮液体积相同的的平衡缓冲，用移液器反复吹打 5 次以上使其充分混匀，磁性分离 1 min，弃上清，重复 2-3 次。
2. 样品结合
将含有 Flag 标签的靶蛋白样品加入到磁珠中，置于混匀仪上 4°C 孵育 1-2 h 或室温孵育 0.5-1 h（具体孵育时间可根据结合效果调整）。
3. 洗涤
孵育完成后，磁性分离 1 min，取出上清（上清可保留作为流穿液，用于电泳鉴定）。使用 5 倍悬浮液体积的洗涤缓冲液清洗，磁性分离 1 min，弃上清，重复 2-3 次。得到靶蛋白-磁珠复合物。如进行免疫沉淀实验，则直接跳转第 6 步进行洗脱。如进行免疫共沉淀实验，则需第 4、5 步进行共沉淀。
4. 共沉淀
将含有目标蛋白的样品加入到靶蛋白-磁珠复合物中，置于混匀仪上 4°C 孵育 1-2 h 或室温孵育 0.5-1 h（具体孵育时间可根据结合效果调整）。
5. 洗涤
孵育完成后，磁性分离 1 min，取出上清（上清可保留，用于电泳鉴定）。使用 5 倍悬浮液体积的洗涤缓冲液清洗，磁性分离 1 min，弃上清，重复2-3 次。得到目标蛋白-靶蛋白-磁珠复合物。
6. 洗脱
提供三种洗脱方案，可根据需要选择不同的洗脱方案。
1) 酸性洗脱：此方法洗脱的样品保持原有生物活性，可用于后期功能分析。
使用 3-5 倍磁珠体积的洗脱缓冲液Ⅰ进行洗脱，用移液器反复吹打 5 次以上使其充分混匀，置于混匀仪上室温孵育 5-10 min，磁性分离 1 min，收集上清液并立即用中和液缓冲液中和 pH （总洗脱液体积的 1/10），样品可用于后期功能分析。可重复 2-3 次并分别收集上清液。
注：
a. 酸性洗脱后磁珠要立即用结合缓冲液平衡，Anti-Flag 琼脂糖磁珠在洗脱液中不要超过 20 min。
b. 洗脱后蛋白短期可 4℃ 存放，若要长期存放建议置于 -20℃ 中。
2) 竞争性洗脱：此方法洗脱的样品保持原有生物活性，可用于后期功能分析。
使用 3-5 倍磁珠体积的洗脱缓冲液Ⅱ进行洗脱，用移液器反复吹打 5 次以上使其充分混匀，置于混匀仪上 4℃ 孵育 30 min，磁性分离 1 min，收集上清液即为目标蛋白。
注：洗脱后蛋白短期可 4℃ 存放，若要长期存放建议置于 -20℃ 中。
3) 变性洗脱：此方法洗脱的样品适用于 SDS PAGE 检测。
在上述洗涤干净的磁珠中加入等体积的 2× SDS PAGE Loading Buffer，充分混匀后 95℃ 加热 5 min。磁性分离 1 min，收集上清液进行 SDS PAGE 检测。
注：由于常规 SDS PAGE Loading Buffer 中含有 β 疏基乙醇和 DTT 会使填料中抗体轻重链断开，同时含有 SDS 的 Loading Buffer 可以使介质配体变性，因此变性洗脱后的 Anti-Flag 琼脂糖磁珠不能重复使用。

1. 请勿离心、干燥或冷冻磁珠。以上操作可能会引起磁珠聚团，并影响磁珠的结合活性。
2. 使用本产品进行 IP 实验前，需先确认样品中 Flag 标签蛋白的表达情况
3. 不要使用含有 DTT 的细胞裂解液样品，DTT 可能会引起凝磁珠上的 Flag 抗体脱落。

4. 我司生产的生化试剂如无特殊标注，基本为非无菌包装，若用于细胞实验，请提前做好预处理。需低温保存的产品，一旦配成溶液，请分装保存，避免反复冻融造成的产品失效。
5. 本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床诊断或治疗，食品及化妆品等用途。请勿存放于普通住宅区。

6. 为了您的安全和健康，请穿好实验服并佩戴一次性手套和口罩操作。

7. 实验结果可由多种因素影响，相关处理只限于产品本身，不涉及其他赔偿。

备注：由于产品信息可能会有优化升级。请以实际收货标签信息为准。