- 生化试剂
- ELISA检测
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抗体蛋白
二抗生物素标记 过氧化物酶(HRP)标记 胶体金试剂 FITC荧光标记 RBITC荧光标记 二抗免疫血清 其它荧光标记二抗 藻红蛋白(PE)荧光标记 胶体金(Gold)标记 SAlexa Fluor荧光系列 碱性磷酸酶(AP)标记 别藻蓝蛋白(APC)荧光标记 其它标记 PE标记二抗 DyLight标记二抗 AU标记二抗 Biotin标记二抗 AMCA标记二抗 Texas Red标记二抗 TRITC标记二抗 HRP标记二抗 未标记二抗 Cy标记二抗 AbBox Fluor标记二抗内参抗体 小分子抗体
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- 基质胶
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中文名称Anti-Flag 亲和凝胶
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英文名称Anti-Flag Affinity Gel
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亚型Mouse IgG2b
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应用蛋白纯化、免疫沉淀、Co-IP
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载量>1.1 mg 蛋白/mL 凝胶
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推荐使用体积每 500 μL 细胞裂解液使用 5 μL 凝胶
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储存缓冲液50% 甘油,10 mM Na3PO4,150 mM NaCl,0.02% (w/v) 叠氮钠,pH 7.4
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保存温度-20℃
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有效期2年

Summus Anti-Flag 亲和凝胶 (Anti-Flag Affinity Gel) 是由高质量的鼠源 lgG2b 单克隆抗体与琼脂糖 Sepharose 4B 共价偶联而得,具有较高的 Flag (DYKDDDDK)标签融合蛋白结合容量 (>1.1 mg 蛋白/mL),可用于细菌和哺乳动物细胞裂解物以及体外表达系统中 Flag 标签蛋白的免疫沉淀 (IP) 实验。本产品蛋白荷载量高,特异性强,也可用于免疫共沉淀 (Co-IP) 及蛋白纯化实验。
本产品每 1 mL 总体积中 0.5 mL 为凝胶。使用前,需将凝胶充分重悬混匀后吸取。

推荐缓冲液 (自备)
洗涤缓冲液:TBST: 50 mM Tris-HCl, 150 mM NaCl, 0.5% Tween-20, pH 7.4
洗脱缓冲液 A:150 mM Glycine, pH 2.5-3.1
洗脱缓冲液 B:1 mg/mL 3× Flag Peptide, 50 mM Tris, 150 mM NaCl, pH 7.4
中和缓冲液:1 M Tris-HCl, pH 8.0
操作步骤(仅供参考)
1. 凝胶预处理
1.1 将 Anti-Flag 亲和凝胶重悬混匀,吸取 10 μL 凝胶悬液 (约 5 μL 凝胶) 至干净的 1.5 mL 离心管。
1.2 加入 600 μL 洗涤缓冲液,混合均匀,10,000 rpm 离心 30 秒,弃去上清。重复 3-4 次。
注:小心吸取上清,避免凝胶损失。
2. 样品的结合
2.1 在上述清洗干净的凝胶中加入 500 μL 细胞裂解液。充分混匀后,置于翻转混合仪上孵育,4℃ 孵育 2 小时 (如需提高结合效率,可延长至过夜)。
2.2 10,000 rpm 离心 30 秒,将上清转移至新离心管 (上清液可用于检测 Flag 标签蛋白是否有残留)。
3. 洗涤
在上述分离得到的凝胶中加入 500 μL 洗涤缓冲液,充分混悬凝胶,10,000 rpm 离心 30 秒,弃去上清。重复以上洗涤步骤 3 次以上,直到洗涤后的上清液中OD280 小于 0.05 为止。
注意:如上清液的 OD280 大于 0.05,适当增加洗涤次数即可。
4. 洗脱
本说明书提供三种 Flag 标签蛋白洗脱方案,操作者可根据需要选择不同的洗脱方案。
4.1 变性洗脱法:此方法洗脱的样品适用于 SDS-PAGE 检测。
步骤:在上述洗涤干净的凝胶中加入 50 μL 1×SDS-PAGE Loading Buffer,充分混匀后煮沸 5 分钟。10,000 rpm 离心 30 秒,取 4 μL 上清液进行 SDS-PAGE 检测。
4.2 酸性洗脱法:此方法洗脱的样品保持原有生物活性,可用于后期功能分析。
步骤:在上述洗涤干净的凝胶中加入 50 μL 洗脱缓冲液 A,充分混匀后室温孵育 10 分钟。10,000 rpm 离心 30 秒,收集上清。按照每 50 μL 洗脱液加入 25 μL 中和缓冲液的比例加入中和缓冲液,将洗脱产物 pH 调节至中性,样品可用于后期功能分析。
4.3 竞争性洗脱:此方法洗脱的样品保持原有生物活性,可用于后期功能分析。
步骤:在上述洗涤干净的凝胶中加入 30-50 μL 洗脱缓冲液 B。充分混匀后,置于翻转混合仪上孵育,室温孵育 1 小时或 4℃ 孵育 2 小时。10,000 rpm 离心 30 秒,收集上清,即得目的蛋白,样品可用于后期功能分析。

1. 本产品使用前务必充分重悬凝胶。
2. 使用本产品进行 IP 实验前,需先确认样品中 Flag 标签蛋白的表达情况。
3. 不要使用含有 dithiothreitol (DTT) 的细胞裂解液样品,DTT 可能会引起凝胶上的 Flag 抗体脱落。
4. 我司生产的生化试剂如无特殊标注,基本为非无菌包装,若用于细胞实验,请提前做好预处理。需低温保存的产品,一旦配成溶液,请分装保存,避免反复冻融造成的产品失效。
5. 本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床诊断或治疗,食品及化妆品等用途。请勿存放于普通住宅区。
6. 为了您的安全和健康,请穿好实验服并佩戴一次性手套和口罩操作。
7. 实验结果可由多种因素影响,相关处理只限于产品本身,不涉及其他赔偿。
备注:由于产品信息可能会有优化升级。请以实际收货标签信息为准。

1. 检测结果条带背景过高?
A. 杂蛋白非特异性结合在抗体、凝胶或离心管壁上。建议对裂解液进行预处理,去除非特异性蛋白;在最后一次洗涤前,将样品转移到新的离心管中操作。
B. 洗涤效果不佳。建议增加洗涤时间及次数;增加 NaCl 或去垢剂的浓度。
2. 检测结果无条带?
A. Flag 标签蛋白没有表达。建议操作:确保目的蛋白带有 Flag 标签;制备新鲜裂解液;使用恰当的蛋白酶抑制剂 。
B. 孵育时间不足。建议延长孵育时间。
C. 裂解液中存在高浓度的 DTT、2-巯基乙醇或其他的还原剂等干扰物质。建议选用合适的裂解液。
D. 过分洗涤。建议减少洗涤次数;降低 NaCl 或去垢剂的浓度。