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- CAS：34215-57-1
- 分子式：C53H85ClN2O6
- 分子量：881.70
基本信息-
中文名称DiO(细胞膜绿色荧光探针)
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CAS34215-57-1
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分子式C53H85ClN2O6
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分子量881.70
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λEx/λ Em(MeOH)484/501 nm
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溶解性DiO 溶于无水乙醇、DMSO 和 DMF，在 DMSO 中的溶解度约为 10mg/mL。较难溶解时，可以适当加热或者超声处理。
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性状黄色固体
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保存温度2-8℃
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有效期1年
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应用DiO 是一种长链碳菁染料。碳菁染料广泛用作亲脂性示踪剂，用于标记细胞、细胞器、脂质体、病毒和脂蛋白
产品简介DiO即DiOC18(3)，是最常用的细胞膜荧光探针之一，呈现绿色荧光。DiO是一种亲脂性膜染 料，进入细胞膜后可以侧向扩散逐渐染色整个细胞的细胞膜。DiO在进入细胞膜之前荧光非常弱， 当与细胞膜结合后其荧光强度大大增强，被激发后可以发出绿色荧光，具有很高的淬灭常数和激发 态寿命，可以用标准的FITC滤光片检测。DiO 作为示踪剂或长期示踪剂，被广泛用于正向或逆向 的，活的或固定的神经等细胞或组织。DiO通常不会显著影响细胞的生存力。 DiO除了细胞膜荧光标记外，还可用于检测细胞的融合和粘附，发育或移植过程中的细胞迁移， 通过FRAP (Fluorescence Recovery After Photobleaching)检测脂在细胞膜上的扩散，检测细胞毒性和 标记脂蛋白等。DiO染色后可进行多聚甲醛（不可使用甲醇等其他试剂）的固定，但不建议在染色 后进行透化的过程。此外，在固定透化（室温下用0.1% TritonX-100透化）后，也可以很好地进行 质膜染色。DiO染色强度通常低于DiI，有时在固定组织中会完全丧失。
操作步骤（仅供参考）一、染色液制备
1. 配置无水DMSO、无水DMF或EtOH储存液：储存液用无水DMSO、无水 DMF 或
EtOH配置浓度1～5mM。DiO在DMSO和DMF中的溶解度比在EtOH中的溶解度高。
注：①未使用的储存液分装储存在-20℃，避免反复冻融。
②发现较难溶解时可以适当加热，并用超声处理以促进溶解。
2. 工作液制备：用合适的缓冲液（如：无血清培养基，HBSS或PBS）稀释储存液，配制浓度为1～30µM的工作液。最常用的工作液浓度为5-10µM。
注：工作液最终浓度建议根据不同细胞系和实验体系来优化。建议从推荐浓度的10倍范围内
开始最优浓度的摸索。
二、悬浮细胞染色
1. 加入适当体积的染色工作液重悬细胞，使其密度为1 ×106/mL。
2. 37℃ 孵育细胞2～20min，不同的细胞最佳培养时间不同。可以以20min作为起始孵育时间，之后优化体系以得到均一的标记结果。
3. 孵育结束，1000～1500rpm离心5min。倾倒上清液， 再次缓慢加入37℃预热的生长培养液重悬细胞。
4. 重复步骤（3）两次以上。
三、贴壁细胞的染色
1. 将贴壁细胞培养于无菌盖玻片上。
2. 从培养基中移走盖玻片，吸走过量培养液，但表面要保持湿润。
3. 在盖玻片的一角加入100µL 的染料工作液，轻轻晃动使染料均匀覆盖所有细胞。
4. 37℃孵育细胞2～20min，不同的细胞最佳培养时间不同。可以以20min 作为起始孵育时间，之后优化体系以得到均一的标记结果。
5. 吸干染料工作液，用培养液洗盖玻片2～3次，每次用预温的培养基覆盖所有细胞，孵育5～10min，然后吸干培养基，但要使表面保持湿润。
四、结果检测
样品可在培养基中进行检测，可以通过荧光显微镜成像或流式细胞仪分析。
注意事项1. DiO染色固定的细胞或组织样品时，样品宜使用配制在PBS中的4%多聚甲醛进行固定，使用其它不适当的固定液会导致荧光背景较高。
2. 荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。
3. 本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床诊断或治疗，食品及化妆品等用途。请勿存放于普通住宅区。
4. 为了您的安全和健康，请穿好实验服并佩戴一次性手套和口罩操作。
5. 实验结果可由多种因素影响，相关处理只限于产品本身，不涉及其他赔偿。
备注：由于产品信息可能会有优化升级，请以实际收货标签信息为准。
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