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斑马鱼产品
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基本信息-
产品名称植物线粒体提取试剂盒(酶法)
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保存温度2-8℃
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有效期1年
产品简介线粒体(mitochondria)是真核细胞中产生能量的重要细胞器。细胞中的能源物质—脂肪、糖、部分氨基酸在此进行最终的氧化，并通过偶联磷酸化生成ATP，供给细胞生理活动之需。对线粒体结构与功能的研究通常是在离体的线粒体上进行的。
本试剂盒用简便的方法和设备即可提取得到完整的植物线粒体。
本试剂盒适用于提取新鲜植物样本的线粒体，用于冻存样本的提取时由于冻存过程中大部分线粒体可能会被破坏，线粒体回收率较低。
本试剂盒提取的线粒体核糖体具有生物活性，可用于线粒体功能研究、蛋白提取等各种下游应用。
本试剂盒采用酶法提取线粒体，相较于非酶法提取，回收率提高，但是耗时较长。如果需要更加快捷的提取试剂盒，可以选择非酶法的提取试剂盒。非酶法提取过程简单方便，速度快，可在1小时内完成，线粒体活性更高，而且绝少交叉污染，但是回收率相比酶法稍低。对提取速度没有要求的话，可以选择酶法提取试剂盒。请根据实际需要选择试剂盒。
产品组成| 组分 | 50T | 100T | 保存温度 |
| 组分 A：植物线粒体提取液 A | 50ml | 100ml | 2-8℃ |
| 组分 B：植物线粒体提取液 B | 25ml | 50ml | 2-8℃ |
| 组分 C：植物线粒体提取液 C | 25ml | 50ml | 2-8℃ |
| 组分 D：线粒体保存液 D | 20ml | 40ml | 2-8℃ |
操作步骤（仅供参考）自备试剂和仪器
离心机、振荡器、匀浆器、涡旋混匀器、移液器、冰箱、冰盒，PBS缓冲液、离心管、吸头、一次性手套、细胞筛（100μm）。
使用方法
一、使用注意事项
1. 旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖和管内壁上的液体离心至管底，避免开盖时试剂损失。
2. 实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
二、植物组织线粒体提取
1. 取 500mg-1g 新鲜植物样本叶片，洗净擦干后去除叶梗和粗脉。用手术剪刀尽可能剪碎。
注：也可用锋利的刀片划成尽可能小的碎片。
2. 加入 1 ml 试剂 A 用组织搅碎机/匀浆机/匀浆器匀浆。
注：有条件的话也可以将叶片组织在液氮中冷冻后稍微捣碎成细的粉末后再进行匀浆。
3. 将匀浆液用 100μm 细胞筛过滤。
注：
●没有细胞筛的话，在 4℃，稍微静置，让粗纤维，成团组织块等沉降，或者以低于100g力条件下离心 1 分钟，收集上部液体，弃组织沉淀。
●有些含黏液较多的样品可能难以吸取，可以将 1ml 吸头尖稍微剪掉一点使用。
4. 将滤液在 14000×g 条件下离心 15 分钟。弃上清，留沉淀。
5. 在沉淀中加入 0.5 ml 提取液 B，充分混匀。
6. 置振荡器振荡 37℃振荡 12-72 小时。
注：
●使用振荡器/摇床的较低转速，提取液能轻微晃动即可。
●没有振荡条件也可以不振荡，中间每隔几小时用移液器吹打混匀即可。
●不同类型的植物样本需要处理的时间差异较大。拟南芥较易处理，鲜嫩叶片较易处理，年龄小的样本处理时间短。拟南芥嫩叶最短 4 小时即可。
●部分细胞壁较厚的植物类型可能需要处理更长时间。可以延长至12 小时以上过夜处理以提高得率。
7. 在 10000×g 条件下离心 15 分钟，弃上清，收集沉淀。
8. 在沉淀中加入 0.5 ml 提取液 C，充分混匀。
9. 置振荡器振荡 10 分钟。
注：
●使用振荡器/摇床的较低转速，提取液能轻微晃动即可。
●没有振荡条件也可以不振荡，稍微延长提取液的处理时间，中间每隔几分钟用移液器吹打混匀即可。
10. 在 200×g 条件下离心 2 分钟。弃沉淀，取上清。
11. 在 1000×g 条件下离心 2 分钟。弃沉淀，取上清。
12. 在 3000×g 条件下离心 3 分钟。弃沉淀，取上清。
13. 将上清 10000×g 离心 15 分钟。弃上清，留沉淀。
14. 沉淀即为线粒体。
15. 用 400μl 线粒体保存液 D 或其他相应的缓冲液重悬沉淀，置冰箱备用或直接用于下游实验。
注：
●可以不用试剂 D 保存线粒体，根据下游实验需要用自己的缓冲液保存即可。
●用试剂 D 保存线粒体后，需要重新回收线粒体可以在 11000×g 离心20 分钟收集沉淀。
注意事项1. 正式实验前请选取几个样本做预实验，以优化实验条件，取得最佳实验效果。
2. 螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖和管内壁上的液体离心至管底，避免开盖时试剂损失。
3. 禁止与其他品牌的试剂混用，否则会影响使用效果。
4. 样品或试剂被细菌或真菌污染或试剂交叉污染可能会导致错误的结果。
5. 最好使用一次性吸头、管、瓶或玻璃器皿，可重复使用的玻璃器皿必须在使用前清洗并彻底清除残留清洁剂。实验后完成后所有样品及接触过的器皿应按照规定程序处理。
6. 我司生产的生化试剂如无特殊标注，基本为非无菌包装，若用于细胞实验，请提前做好预处理。需低温保存的产品，一旦配成溶液，请分装保存，避免反复冻融造成的产品失效。
7. 本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床诊断或治疗，食品及化妆品等用途。请勿存放于普通住宅区。
8. 为了您的安全和健康，请穿好实验服并佩戴一次性手套和口罩操作。
9. 实验结果可由多种因素影响，相关处理只限于产品本身，不涉及其他赔偿。
备注：由于产品信息可能会有优化升级。请以实际收货标签信息为准。
