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斑马鱼产品
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基本信息-
产品名称Annexin V-Alexa Fluor488/PI 细胞凋亡检测试剂盒
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保存温度2-8℃ 避光 勿冷冻
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有效期1年
产品简介细胞凋亡早期改变发生在细胞膜表面，这些细胞膜表面的改变之一是磷脂酰丝氨酸(PS)从细胞膜内转移到细胞膜外，使 PS 暴露在细胞膜外表面。PS 是一种带负电荷的磷脂，正常主要存在于细胞膜的内面，在细胞发生凋亡时细胞膜上的这种磷脂分布的不对称性被破坏而使 PS 暴露在细胞膜外。Annexin V 具有易于结合到磷脂类如 PS 的特性，对 PS 有高度的亲和性。因此，该蛋白可充当一敏感的探针检测暴露在细胞膜表面的 PS。PS 转移到细胞膜外不是凋亡所独特的，也可发生在细胞坏死中。两种细胞死亡方式间的差别是在凋亡的初始阶段细胞膜是 完好的，而细胞坏死在其早期阶段细胞膜的完整性就破坏了。因此，可以采用Annexin V 与PI 双染的方法，通过流式检测细胞早期凋亡。
Jurkat 细胞用紫外诱导凋亡后用 Annexin V-Alexa Fluor 488/PI 双染流式分析图谱
产品组成| 组分 | 20T | 50T |
| 10× Binding Buffer | 2ml | 5ml |
| Propidium Iodide | 0.1ml | 0.25ml |
| rh Annexin V-Alexa Fluor 488 | 0.1ml | 0.25ml |
操作步骤（仅供参考）操作步骤（仅供参考）
1. 细胞样品的准备：
①对于贴壁细胞：小心收集细胞培养液到一离心管内备用。用不含 EDTA 的胰酶消化细胞，至细胞可以被轻轻用移液管或枪头吹打下来时，加入前面收集的细胞培养液，吹打下所有的贴壁细胞，并轻轻吹散细胞。再次收集到离心管内。1000rpm 左右离心 5min，沉淀细胞。对于特定的细胞，如果细胞无法完全离心至离心管底，可以适当延长离心时间或稍稍加大离心力。小心吸除上清，可以残留约 50µl 左右的培养液，以避免吸走细胞。加入约 1ml 4℃预冷的 PBS，重悬细胞，再次离心沉淀细胞，小心吸除上清；
②对于悬浮细胞：1000rpm 左右离心 5min，沉淀细胞。对于特定的细胞，如果细胞无法完全离心至离心管底，可以适当延长离心时间或稍稍加大离心力。小心吸除上清，可以残留约 50µl左右的培养液，以避免吸走细胞。加入约 1ml 4℃预冷的 PBS，重悬细胞，再次离心沉淀细胞，小心吸除上清；
2. 用去离子水按 1:9 稀释结合缓冲液(2ml 10x 结合缓冲液+18ml 去离子水)；
3. 用 1×结合缓冲液重新悬浮细胞，调节其浓度为 1-5×106/ml；
4. 取 100µl 的细胞悬液于 5ml 流式管中，加入 5µl Annexin V-Alexa Fluor 488 混匀后于室温避光孵育 5 分钟；
5. 加入 5µl 20ug/ml 的碘化丙锭溶液(PI)，并加 400µl PBS，立刻进行流式检测。
实验设计
1. 空白管：阴性对照组细胞，不加 Annexin V-Alexa Fluor 488，碘化丙锭溶液(PI)。用于调节电压；
2. 单染管：阳性对照组细胞，只加 Annexin V-Alexa Fluor 488。用于调节补偿；
3. 检测管：处理的细胞，加 Annexin V-Alexa Fluor 488，碘化丙锭溶液(PI)。用空白管和单染管调节好电压补偿后，获得所需要的流式数据。
注意事项1. Annexin V 是与磷脂酰丝氨酸(PS)亲和，而 PS 在不同种属间没差异。在正常细胞中，PS 只分布在细胞膜脂质双层的内侧，而在细胞凋亡早期，PS 由脂膜内侧翻向外侧；
2. 低浓度胰酶消化，轻柔吹打贴壁细胞 2～3 次，离心机 4℃1000rpm 5min 离心，处理得当的话，胰酶造成损伤可以控制在 5%以内，有对照组的情况下对实验结果不会造成明显影响。
3. 先加 PI 不仅染色是否每组都均匀充分很难判断，而且 PI 本身对细胞也是有毒性的，对实验结果影响会比胰酶大，不建议这样做；
4. Annexin V 是Ca 依赖的蛋白，所以不能加入 EDTA，防止 EDTA 螯合了 Ca 离子从而影响 AnnexinV，进而影响结果。
5. 用流式检测凋亡时，PI 受时间的影响很大，因标记了 PI 后会加大细胞毒性，随着时间延长会导致 PI 的染色增加，特别是检测早期凋亡时，如果时间延长除了会导致在流式细胞仪上的细胞分群差距加大外，误差会明显加大。一般 PI 加上后立刻上机，然后在一个小时内检测完成。两种方法都可以，但是按照我们操作步骤造成的误差会更小。
6. 我司生产的生化试剂如无特殊标注，基本为非无菌包装，若用于细胞实验，请提前做好预处理。需低温保存的产品，一旦配成溶液，请分装保存，避免反复冻融造成的产品失效。
7. 本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床诊断或治疗，食品及化妆品等用途。请勿存放于普通住宅区。
8. 为了您的安全和健康，请穿好实验服并佩戴一次性手套和口罩操作。
9. 实验结果可由多种因素影响，相关处理只限于产品本身，不涉及其他赔偿。
备注：由于产品信息可能会有优化升级。请以实际收货标签信息为准。
