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E.coli Poly(A)聚合酶(不含DNase、RNase和磷酸酯酶)  Cite:0    分享
E.coli Poly(A) Polymerase

货号： S29006
复制产品信息
规格:
100U 500U
单位:
支
单价:￥530.00
基本信息
产品简介
产品组成
操作步骤（仅供参考）
注意事项
基本信息
  • 中文名称
    E.coli Poly(A)聚合酶
  • 英文名称
    E.coli Poly(A) Polymerase
  • 别名
    E.coli PAP、PAP酶、Poly(A)加尾酶、PolyA加尾酶
  • 来源
    重组E. coli菌株，携带克隆自大肠杆菌的Poly(A)聚合酶基因
  • 活性定义
    One unit is defined as the amount of enzyme that will incorporate 1nmol of AMP into RNA in a 20µl volumein 10 minutes at 37ºC.
  • 纯度
    不含DNase、RNase和磷酸酯酶
  • 酶储存液
    20mM Tris-HCl (pH7.5, 25ºC), 500mM NaCl, 1mM DTT, 1mM EDTA, 50% (v/v) Glycerol, 0.1% (w/v) TritonX-100.
  • 10X Reaction Buffer
    500mM Tris-HCl (pH8.1, 25ºC), 2.5M NaCl, 100mM MgCl2.
  • 失活或抑制
    加入EDTA至终浓度为10mM，或65ºC加热20min
  • 应用
    用放射性同位素标记的ATP或虫草素(cordycepin)标记RNA；为RNA添加Poly(A)尾，用于反转录后克隆或亲和纯化；增加mRNA的稳定性，从而提高转染至真核细胞中的RNA的翻译效率。
  • 保存温度
    -20℃
  • 有效期
    2年
产品简介

本品E.coli Poly(A)聚合酶，也称E.coli PAP、PAP酶、Poly(A)加尾酶或PolyA加尾酶，能以不依赖于模板的方式催化由ATP转化成的AMP添加到单链RNA的3’末端，以形成Poly(A)尾。E.coli Poly(A)聚合酶能以各种单链RNA作为底物RNA，但双链RNA及过短的寡核苷酸不推荐作为该反应的RNA底物，并且DNA不能作为该反应的底物。实测15nt合成的RNA完全可以作为E.coli Poly(A) Polymerase的底物，在ATP存在时催化形成Poly(A)尾的。E.coli Poly(A)Polymerase催化的Poly(A)加尾反应只能使用ATP，而不能使用ADP或dATP。另外，使用CTP和UTP时，其掺入量不足使用ATP时的5%；而使用GTP时，其完全不能添加到RNA的3'末端。

产品组成
组分100U500U
试剂A:E.coli Poly(A) Polymerase (5U/µl)20µl100µl
试剂B:10X PAP Reaction Buffer50µl250µl
试剂C:10mM ATP50µl250µl


操作步骤（仅供参考）

1. 参考下表在冰浴中设置反应体系。参考下表20μl反应体系中加Poly(A)尾的RNA底物量可以高达10μg，并且可根据实验需要按比例放大反应体系。在Poly(A)加尾反应中，加尾的长度取决于RNA 3’-OH末端的摩尔浓度、反应时间、酶量和ATP浓度。可以通过更改一个或多个因素来调整加尾的长度。按照如下的推荐反应体系，在37ºC孵育30min，加Poly(A)尾长度可以超过100个碱基。

ReagentVolumeFinal Concentration
DEPC-treated Water(14.5-x)µl-
10X PAP Reaction Buffer2µl1X
10mM ATP2µl1mM
RNase Inhibitor (40U/µl)0.5µl1U/µl (Optional)
RNAxµl0.05-0.5µg/µl
E.coli Poly(A) Polymerase (5U/µl)1µl0.25U/µl
Total Volume20µl-

注意：
1. 由于涉及RNA操作，需要严格按照RNA操作的规范进行，避免RNase污染，相关试剂和耗材需要经过DEPC处理以去除RNase或者确保是RNase free的。
2. 用于加尾反应的RNA在使用前应进行适当的纯化，并溶解于nuclease free water中，且溶液中应不含EDTA和盐分。
3. 如果较难确保比较严格的RNase-free，推荐在上述反应体系中添加0.5µl RNase Inhibitor ，以提高溶液中RNA的稳定性。
2. 加尾反应：37ºC孵育30min。
3. 反应终止：加入EDTA至终浓度为10mM，或65ºC加热20min以终止反应。

注意事项

1. 10X PAP Reaction Buffer中不包含ATP。
2. E.coli Poly(A) Polymerase的用量主要影响目的产物的长度，可以根据所需目的产物的长度适当调整酶的用量，如果想得到长度较长的产物可以适当加大酶的用量或延长反应时间。

3. 我司生产的生化试剂如无特殊标注，基本为非无菌包装，若用于细胞实验，请提前做好预处理。需低温保存的产品，一旦配成溶液，请分装保存，避免反复冻融造成的产品失效。
4. 本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床诊断或治疗，食品及化妆品等用途。请勿存放于普通住宅区。

5. 为了您的安全和健康，请穿好实验服并佩戴一次性手套和口罩操作。

6. 实验结果可由多种因素影响，相关处理只限于产品本身，不涉及其他赔偿。

 

备注：由于产品信息可能会有优化升级。请以实际收货标签信息为准。

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