1.伊事达生产的FollowMe^TM Azide Magnetic Beads (Azide磁珠)，也称Azide化磁珠、Azide衍生化磁珠、Azide Derivatized Beads、叠氮磁珠、点击化学反应磁珠或点击化学磁珠，是一类由Azide衍生物与超顺磁性纳米级磁珠共价偶联而成，能在温和的条件下快速、高效、自发地偶联DBCO标记的(DBCO-tagged)的生物分子，也可以在一价铜离子催化下偶联Alkyne (炔烃)标记的(Alkyne-tagged)生物分子，以进行标记、追踪、纯化或分离，可以用于蛋白-蛋白、蛋白-生物分子、DNA-蛋白等的相互作用研究等，是医学和生命学研究中的重要工具。

 2.Azide，中文名为叠氮化物，它与DBCO (二苯并氮杂环辛炔)是生物正交偶联时的配对联用化合物，可以在生物体系中发生环张力促进的叠氮-炔环加成(Strain-promoted azide-alkyne cycloaddition, SPAAC)反应，该反应条件温和，不需要任何催化剂，不影响正常的生物过程，在细胞或者复杂的细胞或组织裂解液中几乎没有脱靶标记。此外，叠氮化物与Alkyne (炔烃)通过一价铜离子的催化发生共价反应，形成稳定的三唑环，该反应非常迅速。两种反应都是常见的点击化学(Click chemistry)反应，广泛应用于生物偶联和标记等。

 3.FollowMe^TM Azide Magnetic Beads (Azide磁珠)与DBCO-tagged/Alkyne-tagged蛋白、抗体、核酸等生物分子发生点击反应的基本原理如下。Azide磁珠在温和的缓冲体系中与DBCO-tagged生物分子自发地进行反应，形成稳定的三唑环；也可在一价铜离子的催化下与Alkyne-tagged生物分子发生共价反应，也形成稳定的三唑环。反应结束后，洗涤磁珠去除未反应的DBCO-tagged或Alkyne-tagged生物分子，即可用于蛋白、抗体或其它生物分子之间的相互作用的研究。本产品与DBCO-tagged或Alkyne-tagged生物分子发生点击反应流程参考图1。
          

图1. 伊事达Azide Magnetic Beads (Azide磁珠) (FY1115)与DBCO-tagged生物分子(图A)、Alkyne-tagged生物分子(图B)发生点击反应的示意图。

4.本产品特异性强、配基密度高、结合量大。与国内外大多数的同类产品相比，本产品Azide配基密度高，约30-50nmol/mg beads，每毫升磁珠悬浊液含约10mg磁珠，对带有DBCO-tagged或Alkyne-tagged的生物分子具有极高的反应特异性，具体的最大结合量与DBCO-tagged或Alkyne-tagged生物分子的分子量相关。

5.本产品反应速度快，使用安全性高。本产品可以在温和条件下自发地与DBCO-tagged生物分子发生反应，也可以在一价铜离子的催化下与Alkyne-tagged生物分子快速反应，节省了操作时间。本产品与DBCO-tagged生物分子反应不需要催化剂(如铜催化剂)，因此对于细胞的毒性更小，也不会在体系中引入新的干扰因素。

6.本产品使用便捷。本产品储存在特殊保护液中，不含甘油，磁性分离，无需离心。与同类Azide Agarose产品相比，使用更方便。

1. 样品的制备。
a. 选择合适的裂解液，用于制备细胞或组织的裂解液。优先推荐选择伊事达生产的Western及IP细胞裂解液用于细胞或 组织样品的裂解。根据特定的实验目的，如有必要，也可以使用伊事达生产的RIPA裂解液(强) 、RIPA裂解液(中) 或RIPA裂解液(弱)用于样品的制备。如果使用自行配制的或其它公司生产的裂解液，需要确保裂解液的pH 为6-8。
b. 具体的细胞或组织样品裂解的制备步骤请参考裂解液的使用说明。制备好的裂解液上清宜置于冰上或4ºC存放，随后即可用于 click反应。新鲜制备好的样品，建议尽量当天完成免疫沉淀等后续操作，但如果样品不能当天使用，也可以适当分装后-80ºC 冻存。
c. 如果是自行标记的DBCO-tagged/Alkyne-tagged生物分子体系，要确保完全去除游离的DBCO/Alkyne基团，否则会影响Azide 磁珠与DBCO-tagged/Alkyne-tagged生物分子的反应效率。推荐使用脱盐柱以去除游离的叠氮化物。
2. Azide磁珠准备。
由于Azide磁珠储存在特殊保护液中，所以需要在加入样品前适当洗涤。
a. 用移液器轻轻吹打重悬Azide磁珠，按照DBCO-tagged/Alkyne-tagged生物分子的摩尔数，计算所需要的Azide磁珠体积。取适量Azide磁珠至一洁净离心管中，加入1X TBS 至最终体积为约0.5ml。注：通常Azide磁珠的用 量应略高于DBCO-tagged/Alkyne-tagged生物分子的摩尔数量，以确保DBCO-tagged/Alkyne-tagged生物分子完全参与反 应。如果初始Azide磁珠体积大于0.2ml，可以考虑先直接置于磁力架上分离10秒，去除上清，然后再加入 1X TBS 至最终体积为约0.5ml。
b. 用移液器轻轻吹打重悬Azide磁珠。置于磁力架上分离10秒，去除上清。重复上述步骤两次。
c. 按照初始体积的量，用Click Reaction Buffer重悬Azide磁珠。
3. 点击反应。
a. 加入磁珠并孵育。准备好的Azide磁珠与样品混合，对于DBCO-tagged生物分子样品，在室温反应30-60分钟或者4ºC反应2小时；对于Alkyne-tagged生物分子样品，在一价铜离子催化下室温反应30分钟，反应过程推荐在翘板摇床(也称侧摆摇床)上进行。推荐的速度为25rpm上下翻转。
b. 磁分离。孵育完毕后，置于磁力架上分离10秒，去除上清。
c. 洗涤。加入500μl的1X TBS ，用移液器轻轻吹打重悬Azide磁珠。置于磁力架上分离10秒，去除上清。重复洗 涤三次。洗涤完成后，DBCO-tagged/Alkyne-tagged生物分子已经通过点击反应共价偶联到磁珠上，并可以进行下游实验。

1.由于DBCO等基团能与Azide磁珠自发发生点击反应，所以须确保体系里不存在有干扰的DBCO基团。如果有干扰的DBCO基团的物质，推荐使用伊事达脱盐柱进行脱盐处理。

2.本产品在高浓度尿素里不稳定，使用体系须避免含有高浓度尿素。

3.本产品需维持pH为6-8，避免高速离心、干燥；请勿长时间将磁珠置于磁场中，否则可能会引起磁珠聚团。

4.本产品使用前要适当充分重悬，即颠倒若干次使磁珠混合均匀，充分震荡或超声使磁珠呈均匀的悬浮状态。

5.如果使用真空泵等仪器吸取上清液，须注意真空泵的吸液强度，以免吸力过大而吸取到聚集的磁珠。

6.本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

7.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

备注：由于产品信息可能会有优化升级，请以实际收货标签信息为准。