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抗体蛋白
二抗生物素标记 过氧化物酶(HRP)标记 胶体金试剂 FITC荧光标记 RBITC荧光标记 二抗免疫血清 其它荧光标记二抗 藻红蛋白(PE)荧光标记 胶体金(Gold)标记 SAlexa Fluor荧光系列 碱性磷酸酶(AP)标记 别藻蓝蛋白(APC)荧光标记 其它标记 PE标记二抗 DyLight标记二抗 AU标记二抗 Biotin标记二抗 AMCA标记二抗 Texas Red标记二抗 TRITC标记二抗 HRP标记二抗 未标记二抗 Cy标记二抗 AbBox Fluor标记二抗内参抗体 小分子抗体抗体标记试剂盒细菌抗体蛋白病毒包装试剂杂交瘤融合筛选WB、IHC、ELISA相关试剂细胞培养试剂病原微生物抗原抗体假病毒抗体校准品其他抗原抗体标记的标签抗体病理级IHC抗体重组蛋白
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基本信息-
中文名称Anti-Flag 磁珠
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英文名称Anti-Flag Magnetic Beads
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内容物高质量 Anti-Flag 单克隆抗体偶联磁珠
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磁珠粒径200 nm
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磁珠浓度10 mg/mL
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抗体亚型鼠源 IgG1
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融合蛋白结合容量>0.6 mg/mL
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适用范围IP，Co-IP，Flag-tag 蛋白纯化
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推荐使用体积每 500 μL 细胞裂解液使用 10 μL 磁珠
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保存温度2-8℃ (请勿离心、干燥或冷冻磁珠)
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有效期2年
产品简介Summus Anti-Flag Magnetic Beads 由高质量的鼠源 IgG1 单克隆抗体与氨基磁珠共价偶联制备，具有较高的 Flag (DYKDDDDK) 标签融合蛋白加载容量(>0.6 mg 蛋白/mL)，可用于细菌和哺乳动物细胞裂解物以及体外表达系统中 Flag 标记蛋白的免疫沉淀 (IP) 实验。本产品可以通过磁力架或自动分离仪器分离，实验便捷有效。本产品蛋白荷载量高，特异性强，也可用于免疫共沉淀 (Co-IP) 和小量的蛋白质纯化实验。
操作步骤（仅供参考）推荐缓冲液(自备)
洗涤缓冲液：TBST: 50 mM Tris-HCl, 150 mM NaCl,0.5% Tween-20, pH 7.4
洗脱缓冲液 A：0.15 M Glycine, pH 2.5-3.1
洗脱缓冲液 B：1 mg/mL 3× Flag peptide, 50 mM Tris, 0.15 MNaCl, pH 7.4
中和缓冲液：1 M Tris-HCl, pH 8.0
操作步骤（仅供参考）
1. 磁珠预处理
混悬 Anti-Flag Magnetic Beads，取 10 μL 磁珠，置于 1.5 mL EP 管中，加入 500 μL 洗涤缓冲液，充分混悬，置于磁力架上磁性分离，弃上清。重复以上洗涤步骤 2 次。
2. 样品的结合
在上述分离得到的磁珠中加入 500 μL 细胞裂解液，充分混悬，置于翻转混合仪孵育，室温孵育 2 小时或者 4ºC 条件下孵育过夜。置于磁力架上磁性分离，弃上清。注意：结合过程中，磁珠可能会出现聚团或呈片状，属于正常现象，不会影响实验结果。
3. 洗涤
在上述分离得到的磁珠中加入 500 μL 洗涤缓冲液，充分混悬磁珠，磁性分离，弃上清。重复以上洗涤步骤 3 次，直到洗涤后的上清液中 OD280小于 0.05 为止。
注意：如上清液的 OD280 大于 0.05，适当增加洗涤次数即可。
4. 洗脱
本说明书提供三种 Flag 标签蛋白洗脱方案，操作者可以根据后期检测的需要选择不同的洗脱方案。
a. 变性洗脱法：此方法洗脱的样品适用于 SDS-PAGE 检测。步骤：分离磁珠，弃上清，向磁珠中加入 50 μL 的 1×SDS-PAGE LoadingBuffer 混合均匀，95ºC 加热 5 分钟。分离磁珠，收集上清至新的 EP 管，进行 SDS-PAGE 检测。
b. 酸性洗脱法：此方法洗脱的样品保持原有生物活性，可用于后期功能分析。
步骤：分离磁珠，弃上清，向磁珠中加入50 μL的洗脱缓冲液A 混合均匀，室温孵育 10 分钟。分离磁珠，收集上清至新的 EP 管，按每 50 μL 洗脱液加入 25 μL 中和缓冲液的比例加入中和缓冲液，将洗脱产物 pH 调节至中性，样品用于后期功能分析。
c. 竞争性洗脱法：此方法洗脱的样品保持原有生物活性，可用于后期功能分析。
步骤：分离磁珠，弃上清，向磁珠中加入 3-5 倍磁珠体积的洗脱缓冲液 B混合均匀，室温孵育 1 小时或者 4ºC 条件下孵育 1-2 小时。分离磁珠，收集上清至新的 EP 管，即为目的蛋白，样品用于后期功能分析。
注意事项1. 本产品 pH 值为 6-8，禁止冻结。
2. 本产品应避免离心、干燥或冻存，禁止长时间置于磁场，可能会引起磁珠聚团，操作过程应轻柔，避免抗体脱落。
3. 使用本产品进行 IP 实验前，需先确认样品中 Flag 标签融合蛋白的表达情况。
4. 不要使用含有 dithiothreitol (DTT) 的细胞裂解液样品，DTT 可能会引起磁珠上的 Flag 抗体脱落。
5. 我司生产的生化试剂如无特殊标注，基本为非无菌包装，若用于细胞实验，请提前做好预处理。需低温保存的产品，一旦配成溶液，请分装保存，避免反复冻融造成的产品失效。
6. 本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床诊断或治疗，食品及化妆品等用途。请勿存放于普通住宅区。
7. 为了您的安全和健康，请穿好实验服并佩戴一次性手套和口罩操作。
8. 实验结果可由多种因素影响，相关处理只限于产品本身，不涉及其他赔偿。
备注：由于产品信息可能会有优化升级。请以实际收货标签信息为准。
常见问题1. 检测结果条带背景过高？
A. 可能是由于蛋白非特异性结合到抗体、磁珠或 EP 管上，建议对裂解液进行预处理，去除非特异结合的蛋白；在最后一次洗涤前，转移整个样品到新的EP 管中，然后磁性分离或离心分离。
B. 洗涤效果不佳，也会导致条带较高的背景，建议增加洗涤时间与次数。
2. 检测结果无条带？
A. Flag 标签融合蛋白没有表达可能导致检测结果无条带。
建议操作：a. 确保目的蛋白带有 Flag 标签；b. 制备新鲜的裂解液；c. 使用恰当的蛋白酶抑制剂。
B. 孵育时间不足可能导致检测结果无条带，建议延长孵育时间。
C. 裂解液中存在高浓度的 DTT、2-巯基乙醇或其他的还原剂等干扰物质，建议选用合适的裂解液。
