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基本信息-
产品名称Mito-Tracker Green染色液(1000X)
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CAS201860-17-5
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分子式C34H28Cl5N3O
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分子量671.88
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保存温度-20℃ 避光
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有效期1年
产品简介Mito-Tracker Green染色液(1000X) (Mito-Tracker Green Staining Solution, 1000X),是一种快速、便捷的用于3D培养的细胞球或类器官等的活细胞线粒体染色的溶液。仅需染色10分钟就可在荧光显微镜下观察到非常明亮的活细胞线粒体绿色荧光染色。
Mito-Tracker Green 为采用 Molecular Probes 公司的 carbocyanine 进行了荧光标记的一种 Mito-Tracker ,也称Benzoxazolium,2-[3-[5,6-dichloro-1,3-bis[[4-(chloromethyl)phenyl]methyl]-1,3-dihydro-2H-benzimidazol-2-ylidene]-1-propenyl]-3-methyl-, chloride。可以用作线粒体特异性的荧光探针。和Rhodamine 123或JC-1相比,Mito-Tracker Green对于线粒体的染色不依赖于线粒体膜电位。Mito-Tracker Green只可以用于对活细胞的染色,细胞经过固定后会导致荧光会消失。
Mito-Tracker Green最大激发光波长为490nm,最大发射波长为516nm,呈绿色荧光。
本产品可用于各种方法培养出的3D细胞球或类器官,包括超低吸附细胞培养板、基质胶或Matrigel包被的平板、琼脂糖包被的平板、细胞悬滴培养板等。对于常规的3D细胞活细胞染色,仅需加入本产品避光孵育10分钟即可进行荧光检测。
操作步骤(仅供参考)本步骤以96孔板,每孔接种100μl细胞为例,如使用其它类型的多孔板,各试剂使用量请按照相应比例进行换算。
1. 3D细胞的准备
在96孔3D培养板中每孔接种100μl细胞,细胞的接种量根据具体的实验方案,例如培养天数、需要的3D细胞球状体的大小等确定,按照3D细胞培养方案培养细胞,并按照实验设计进行一定的处理。
注:为达到最佳的使用效果,具体细胞球培养时间、药物等干预时间可以根据细胞种类、具体的实验需求等进行调整。例如,对于HCT-116细胞,通常接种培养48小时形成较为紧实的细胞球后进行干预染色效果较好。
2. Mito-Tracker Green染色
a. Mito-Tracker Green染色液(1X)的配制:如下表所示,按照96孔板每孔需要100μl Mito-Tracker Green染色液(1X)的量,用PBS稀释配制适量的 Mito-Tracker Green染色液(1X)。
| Sample number | 10 samples | 50 samples | 100 samples |
| PBS | 1ml | 5ml | 10ml |
| Mito-Tracker GreenStaining Solution (1000X) | 1μl | 5μl | 10μl |
| Total volume | ~1ml | ~5ml | ~10ml |
注1:配制好的Mito-Tracker Green染色液(1X)必须一次使用完毕,不能冻存。
注2:Mito-Tracker Green染色工作液中的Mito-Tracker Green的最终浓度可以根据不同细胞系和实验体系通过预实验进行优化。Mito-Tracker Green的工作浓度通常为0.5-2X,推荐使用浓度为1X。
b. 小心去除原有细胞培养液。
每孔加入100μl Mito-Tracker Green染色液(1X),在适宜于细胞培养的温度避光孵育10分钟。
注1:为达到最佳的染色效果,具体染色时间可以根据细胞种类、培养天数、细胞球状大小等进行调整。
注2:任何液体吸除或加入的过程须轻缓,避免破坏或吹散3D细胞球。3D细胞球通常沉浮在培养板或培养皿等培养器的底部,培养板在对着光线时能看到孔内针尖大小的乳白色细胞球,吸除孔内液体时须尽量避开细胞球以免将细胞球吸走。可以根据孔内液体的体积将移液器调至合适的量程,例如需要吸除的液体体积为100μl,将200微升移液器的量程调整到50-70微升,避开细胞球从液体边缘缓慢、分次吸除。孔内加入液体时,沿着孔壁小心、缓慢加入,避免破坏或吹散3D细胞球。
3. 荧光拍摄
染色结束后,小心去除孔内染色液,沿着孔壁缓慢加入适量的PBS洗涤细胞球1次并用完全培养基换液以终止染色,即可在荧光显微镜下观察。Mito-Tracker Green为绿色荧光探针,最大激发光波长为490nm,最大发射波长为516nm。
注:任何液体吸除或加入的过程须轻缓,避免破坏或吹散3D细胞球。
注意事项1. 细胞球在外力的作用下容易变形或分散,PBS洗涤及换液等过程须轻缓,避免破坏或吹散3D细胞球。
2. Mito-Tracker Green可以用于活细胞的线粒体荧光标记,但不适合用于固定细胞的标记。
3. 本产品浓度经过优化确保可以满足活细胞染色及各种常规染色的需要。如需使用特定浓度的Mito-Tracker Green,请选购Mito-Tracker Green (线粒体绿色荧光探针) (S51540)。
4. 荧光染料都存在淬灭的问题,建议染色后尽量当天完成检测。
5. 我司生产的生化试剂如无特殊标注,基本为非无菌包装,若用于细胞实验,请提前做好预处理。需低温保存的产品,一旦配成溶液,请分装保存,避免反复冻融造成的产品失效。
6. 本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床诊断或治疗,食品及化妆品等用途。请勿存放于普通住宅区。
7. 为了您的安全和健康,请穿好实验服并佩戴一次性手套和口罩操作。
8. 实验结果可由多种因素影响,相关处理只限于产品本身,不涉及其他赔偿。
备注:由于产品信息可能会有优化升级。请以实际收货标签信息为准。



