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二抗生物素标记 过氧化物酶(HRP)标记 胶体金试剂 FITC荧光标记 RBITC荧光标记 二抗免疫血清 其它荧光标记二抗 藻红蛋白(PE)荧光标记 胶体金(Gold)标记 SAlexa Fluor荧光系列 碱性磷酸酶(AP)标记 别藻蓝蛋白(APC)荧光标记 其它标记 PE标记二抗 DyLight标记二抗 AU标记二抗 Biotin标记二抗 AMCA标记二抗 Texas Red标记二抗 TRITC标记二抗 HRP标记二抗 未标记二抗 Cy标记二抗 AbBox Fluor标记二抗内参抗体 小分子抗体
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斑马鱼产品
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产品名称Tunel细胞凋亡检测试剂盒(绿色荧光)
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保存温度按试剂盒各组分温度保存
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有效期1年

细胞在发生凋亡时,会激活一些 DNA 内切酶,这些内切酶会切断核小体间的基因组DNA。细胞凋亡时抽提 DNA 进行电泳检测,可以发现 180-200bp 的 DNA ladder。基因组 DNA 断裂时,暴露的3'-OH可以在末端脱氧核苷酸转移酶(Terminal Deoxynucleotidyl Transferase,TdT)的催化下加上绿色荧光探针(FITC)标记 的 dUTP(fluorescein-dUTP) , 从 而 可 以 通 过 荧 光 显 微 镜 或 流 式 细胞仪进行检测,这就是TUNEL(TdT-mediated dUTP Nick-End Labeling)法检测细胞凋亡的原理。
本试剂盒具有以下优点:1. 操作简便高效,只需一步染色反应,1-2h 内即可完成染色,无需二抗孵育等步骤;2. 特异性强,灵敏度高,更容易标记凋亡细胞,且目标位置荧光明亮,染色背景低。该试剂盒可用于检测冷冻或石蜡切片中的细胞凋亡情况,也可检测培养的贴壁细胞或悬浮细胞的凋亡情况。可选择性的检测凋亡细胞,而非坏死细胞或因辐照和药物治疗而造成的 DNA 链断裂的细胞。

组分 | 20T | 保存温度 |
试剂(A): TDT 酶 | 20μL | -20℃ |
试剂(B): 荧光标记液 | 1mL | -20℃ 避光 |
试剂(C): 蛋白酶 K(2mg/ml) | 10μL | -20℃ 避光 |
试剂(D): DNase I 溶液 | 10μL | -20℃ 避光 |
试剂(E): DNase I 稀释液 | 1mL | 2-8℃ |

自配材料
S51102-4%组织细胞固定液,蒸馏水,石蜡切片处理相关试剂;1×PBS 缓冲液(pH7.2-7.4),0.2% Triton X-100(PBS 配制)免疫组化笔,抗荧光衰减封片剂。
实验设计
A. 阳性对照(可选):
DNase I 处理制备阳性对照载玻片。DNase I 可以消化单链或双链DNA产生单脱氧核苷酸或单链或双链的寡脱氧核苷酸的核酸内切酶,人为造成细胞凋亡。
B. 阴性对照(可选):
使用不含 TdT 酶的荧光标记液,用蒸馏水替代 TdT 酶。
C. 实验处理组
D. 实验对照组
操作步骤(仅供参考)
1. 样本准备:
(1)对于贴壁细胞或细胞涂片
a. PBS 清洗 1 次。
(注:如果担心细胞涂片的细胞贴得不牢,可以干燥样品使细胞贴得更牢)
b. 固定:加入适量 4%组织细胞固定液,室温固定 30min。PBS 清洗 2 次。
c. 通透:加入适量 0.2% Triton X-100(PBS 配制),室温通透 5-10min。PBS 清洗2 次。
d. 转步骤 2. TUNEL 反应。
(2)对于悬浮细胞或细胞悬液
a. 收集细胞(3-5×106个细胞),1000rpm 离心 5 min,PBS 清洗 2 次。
b. 固定:加入适量 4%组织细胞固定液充分重悬细胞,4℃固定 30min。2000rpm 离心5 min,PBS清洗2次。
c. 通透:加入适量 0.2% Triton X-100(PBS 配制),室温通透 5-10min。2000rpm 离心5 min,PBS清洗2次。
d. 转步骤 2. TUNEL 反应。
(3)对于石蜡组织切片
a. 脱蜡与水化:将切片样本依次放入二甲苯 I(10 min)→ 二甲苯 II(10 min)→100%乙醇I(5min)→ 100%乙醇 II(5 min)→ 95%乙醇(5 min)→ 90%乙醇(5 min)→ 80%乙醇(5 min)→70%乙醇(5 min)→ ddH2O 冲洗 5 min,冲洗 2 次。
(注:二甲苯有毒,易挥发,请在通风橱中进行此操作。)
b. 用滤纸吸干切片样本周围液体,用免疫组化笔圈好样本轮廓,以便下游通透与标记。(注:若在后续实验操作中发现免疫组化笔画的轮廓圈被破坏,需及时补画。)
c. 通透:按 1: 100 的比例,将蛋白酶 K(2mg/ml)用 PBS 稀释至终浓度 20µg/mL,在每个样本上滴加50μL,使溶液覆盖全部样本区域,20-37℃孵育 20min。
(注:蛋白酶 K 可通透细胞膜和核膜,从而使后续步骤的染色试剂充分进入细胞核进行反应,提高标记效率。孵育时间过长会增加组织切片在后续洗涤步骤中从载波片上脱落的风险,过短则可能造成透性处理不充分,影响标记效率。为得到更好的结果,蛋白酶K的浓度、孵育时间、温度需根据不同类型组织样本进行优化。)
d. PBS 漂洗切片 2 次,每次 5 min。
(注:这一步必须把 Proteinase K 洗涤干净,否则会严重干扰后续的标记反应。)
e. 转步骤
2. TUNEL 反应
(1) 配制 TUNEL 染色工作液
1 个样品 | 5 个样品 | 10 个样品 | |
TDT 酶 | 1μL | 5μL | 10μL |
荧光标记液 | 49μL | 245μL | 490μL |
TUNEL 染色工作液 | 50μL | 250μL | 500μL |
(2) 对于贴壁细胞、细胞涂片或组织切片
a.在样品上加 50μL TUNEL 染色工作液,37℃避光孵育 60 分钟。(注意:50μL TUNEL 染色工作液适合涂片、切片或 96 孔板、48 孔板、24 孔板或 12 孔板的一个孔,如果是 6 孔板中的一个孔TUNEL 染色工作液宜使用 100μL。如果待检测的样品为涂片、切片或在 24 孔板、12 孔板或 6 孔板中,可以使用防蒸发膜,或自行尝试使用自封袋或者其它适当材料自行裁剪成比孔略小的圆形塑料片,滴加TUNEL 检测液后覆盖在样品上,可以防止 TUNEL 染色工作液蒸发,并且使 TUNEL 染色工作液均匀覆盖样品。自行裁剪圆片时需要连着圆片突出一个角或连着一条,并将圆形之外的突出部分折叠,方便染色结束后利用突出部分顺利取出圆片。也可以用 PAP Pen 圈出一个区域进行染色。孵育时需注意在多余的孔和多孔板的空隙中加入适量水以保持湿润,从而尽量减少 TUNEL 染色工作液的蒸发。)
b. PBS 或 HBSS 洗涤 3 次。
c.(可选)加入 100μL 浓度为 10μg/mL 的 DAPI 染液,室温避光孵育 5-10min。染色完成后,弃去DAPI染液,PBS 清洗 2 次,每次 5min。
d. 用抗荧光淬灭封片液封片后荧光显微镜下观察。可以使用的激发波长范围为450-500nm,发射波长范围为 515-565nm(绿色荧光)。
(3) 对于悬浮细胞或细胞悬液
a. 每管加入 50μL TUNEL 染色工作液轻轻重悬细胞,37℃避光孵育 60 分钟。
b. PBS 或 HBSS 洗涤 2 次。
c. 加入 100μL 浓度为 10μg/mL 的 DAPI 染液,室温避光孵育 5-10min。染色完成后,弃去DAPI 染液,PBS 清洗 2 次,每次 5min。
d. 用 250-500μL PBS 或 HBSS 悬浮。
e. 此时可以用流式细胞仪进行检测或涂片后在荧光显微镜下观察。可以使用的激发波长范围为450-500nm,发射波长范围为 515-565nm(绿色荧光)。

1. 荧光染料均存在淬灭问题,请尽量注意避光,以减缓荧光淬灭。
2. 使用前请将产品瞬时离心至管底,再进行后续实验。
3. 染色背景较重或非特异性着色明显可适当减少染色时间。
4. 实验时建议增加阴性对照和阳性对照
5. 我司生产的生化试剂如无特殊标注,基本为非无菌包装,若用于细胞实验,请提前做好预处理。需低温保存的产品,一旦配成溶液,请分装保存,避免反复冻融造成的产品失效。
6. 本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床诊断或治疗,食品及化妆品等用途。请勿存放于普通住宅区。
7. 为了您的安全和健康,请穿好实验服并佩戴一次性手套和口罩操作。
8. 实验结果可由多种因素影响,相关处理只限于产品本身,不涉及其他赔偿。
备注:由于产品信息可能会有优化升级。请以实际收货标签信息为准。