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活性氧(Reactive oxygen species, ROS)包括过氧化氢(H2O2,Hydrogen peroxide)、羟基自由基(•OH,Hydroxyl radical )、单线态氧(1O2,Singlet oxygen)、一氧化氮(NO,Nitric oxide)、超氧阴离子(•O2-,Superoxideanion)、过氧化自由基(ROO•,Peroxyl radical)、过氧羟自由基(HOO•,hydroperoxyl)及其下游产物过氧化物、过氧亚硝基阴离子(ONOO-,Peroxynitrite anion)、ClO-和羟化物等,参与细胞生长增殖、发育分化、衰老和凋亡以及许多生理和病理过程。
DHE 是一种具有细胞膜通透性的荧光探针,可被活性氧特异性氧化生成红色荧光物质,红色荧光强度与活性氧水平成正比,ROS 阴性细胞仅有较低的荧光强度,ROS 阳性细胞有较强的红色荧光。通过观察红色荧光强度可反映组织切片内活性氧的水平。
该染色试剂盒适用于振动切片或新鲜的冰冻切片样本的活性氧染色,石蜡切片样本的ROS在切片的的制作过程中会损失掉,所以一般不适用石蜡切片样本的活性氧检测。

试剂名称 | 100T | 保存 |
试剂(A): 1×清洗液 | 30mL | 2-8℃ |
试剂(B): DHE 荧光探针 | 100uL | -20℃,避光 |
DHE 荧光探针为储备液,使用前用蒸馏水将此探针稀释200-500 倍配成 DHE 工作液。 |

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ROS阳性部位红色
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细胞核蓝色

1.取材新鲜组织样本,制备冰冻切片,将切片置于室温环境下干燥复温3-5min。
2.滴加1×清洗液覆盖组织室温处理5-10min。
3.尽量倾去或吸尽清洗液,滴加稀释好的DHE工作液覆盖整个组织切片上,室温避光孵育1h,1×PBS或1×PBST洗3次,每次3-5min。
4.(可选)使用DAPI复染液(10ug/ml)染色5-10min,1×PBS或1×PBST洗3次,每次3min。
5.使用抗荧光衰减封片剂进行封片。
6.结果观察:ROS活性位点观察的荧光条件为最大激发波长488~535nm(最适激发波长是518nm),最大发射波长为610nm;DAPI染色在紫外通道或在激发波长330-380nm,发射波长420nm下观察。

1.保存:-20℃,避光
2.有效期:6个月

1.ROS容易分解,因此样本需要新鲜采集,不建议使用固定剂固定,液氮速冻后直接切片,并尽快完成染色,整个过程建议在8h内完成。
2.不建议使用石蜡切片样本和长期保存(超过3天以上)的冰冻切片样本,二者的活性氧保存效果均不佳。
3.建议做预试验,荧光探针的稀释倍数可根据样本染色后的荧光强度进行调整,染色时间也可以相应缩短或延长。
4.本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床诊断或治疗,食品及化妆品等用途。请勿存放于普通住宅区。
5.为了您的安全和健康,请穿好实验服并佩戴一次性手套和口罩操作。
6.实验结果可由多种因素影响,相关处理只限于产品本身,不涉及其他赔偿。
备注:由于产品信息可能会有优化升级,请以实际收货标签信息为准。