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BCA蛋白定量法是目前广泛使用的蛋白定量方法之一。本产品是基于BCA(Bicin-choninic Acid)法研制而成,实现了对蛋白质进行快速、稳定、灵敏的浓度测定。其原理是在碱性环境下蛋白质分子中的肽链结构能与Cu2+络合生成络合物,同时将Cu2+还原成Cu+,BCA试剂可敏感特异地与Cu+结合,形成稳定的有颜色的复合物,其在562nm处有高的光吸收值,颜色的深浅与蛋白质浓度成正比,可根据吸收值的大小来测定蛋白质的含量。本试剂盒含有一系列浓度的蛋白质标准品溶液(BSA溶液),即取即用,无需稀释,方便快捷。
方便快捷
提供即用型标准品,省去繁琐的稀释步骤
准确性高
变异系数远小于考马斯亮蓝染色法
线性范围宽
灵敏,检测范围:20~2000μg/mL
兼容性好
与金属离子、还原剂、螯合剂及去污剂兼容性较好
以微孔酶标仪法为例:
步骤1:
配置显色工作液:
a. 计算显色工作液总量:
工作液总量 = (BSA标准品样本个数+待测样本个数)×复孔数×每个样本显色工作液体积
举例:BSA标准品样本个数为8个,待测样本个数3个,复孔数3个。
显色工作液总量 = (8个BSA标准品样本+3个待测样本)×3个复孔×200μL(每个样本工作液体积) = 6.6 mL
b. 根据计算出的所需显色工作液用量,将试剂A和试剂B按照50:1的体积比,配制显色工作液,充分混匀:
注意:
⑴由于加样可能存在误差,建议配制BCA工作液时,多配制1~2个孔的量;
⑵新配制的BCA工作液室温密封条件下可稳定保存24h。
步骤2:
定量检测:
① 分别取 即用型BSA标准品①~⑧各20μL加到 96孔板中( BSA标准品使用前须充分溶解摇匀)
② 用1×PBS或0.9%生理盐水将样品适当稀释(可以多作几个梯度,如2倍、4倍、8倍稀释),加20μL到96孔板的样品孔中;
③ 各孔加入200μL显色工作液,充分混匀,盖上96孔板盖,37℃孵育30min,冷却至室温;
注意:也可以室温放置2h,或60℃放置30min。BCA法测定蛋白浓度时,吸光度会随着时间的延长不断加深。并且显色反应会因温度升高而加快。如果蛋白浓度较低,可在较高温度孵育,或延长孵育时间。
④ 用酶标仪测定每个样品及BSA标准品的A562,或540~590nm之间的其它波长的吸光度,注意要减去空白对照(标准品①+工作液)的吸光度。
⑤ 绘制标准曲线,计算样品中的蛋白浓度。
注意:数据处理时需要去除明显错误的值。待测样品浓度可以从标准曲线中查得, 实际浓度需要乘以样品的稀释倍数。如果是计算机绘制的曲线,可以从计算机给出的线性方程式计算出待测样品的浓度。
本产品冰袋运输;即用型 BSA 标准品 -20℃保存,其它组分4℃保存,保质期12个月。
1.本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床诊断或治疗,食品及化妆品等用途。请勿存放于普通住宅区。
2.为了您的安全和健康,请穿好实验服并佩戴一次性手套和口罩操作。
3.实验结果可由多种因素影响,相关处理只限于产品本身,不涉及其他赔偿。
备注:由于产品信息可能会有优化升级。请以实际收货标签信息为准。