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基本信息-
产品名称吖啶橙荧光染色试剂盒
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保存温度2-8℃ 避光
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有效期6个月
产品简介Acridine Orange(AO）属于三环杂芳香燃料，可以标记 DNA、RNA，属于异染性荧光染料。该染料具有膜通透性，能透过细胞膜，使核 DNA 和 RNA 染色，因此AO常用于细胞内 DNA 和 RNA 进行检测。AO 与核酸结合方式主要有：1、插入性结合，AO嵌入核酸双链的碱基对之间，这种结合方式主要为 AO 与 DNA 的结合，其荧光发射峰为530nm，激发后呈绿色荧光；2、静电吸引，带正电荷的 AO 与单链核酸的磷酸根（带负电荷）产生静电间的吸引结合，这种结合方式主要为 AO 与 RNA 的结合，其荧光发射峰为640nm，激发后呈红色荧光，少量结合会呈橘黄色或桔红色荧光，因此吖啶橙嵌合到双链DNA分子中显绿色，与 DNA 单链或 RNA 结合时发橘黄色或橙红色荧光。
本品AO 荧光染色试剂盒（Acridine Orange Detection Kit）主要由AOStain、AO Stain Buffer 组成，常用于细胞凋亡的检测，染色后在荧光显微镜下观察，吖啶橙可透过正常细胞膜，使细胞核呈绿色或黄绿色均匀荧光；而在凋亡细胞中因染色质固缩或断裂为大小不等的片段，形成凋亡小体。AO 使其染上致密浓染的黄绿色荧光或黄绿色碎片颗粒，而坏死细胞黄荧光减弱甚至消失，AO 染色常与 EB 染色合用双染，EB 只染死细胞使之产生橘黄色荧光，由此可区分出正常细胞、凋亡细胞及坏死细胞。
产品组成| 组分 | 100T | 保存温度 |
| 试剂(A): AO Stain | 500μl | 2-8℃ 避光 |
| 试剂(B): AO Stain Buffer(10×) | 10ml | 2-8℃ |
操作步骤（仅供参考）自备材料
1. 去离子水、PBS、EB 染色液（备选）
2. 细胞计数板、载玻片、盖玻片、荧光显微镜、低速离心机
操作步骤 (仅供参考)
( 一) AO 单独染色
1. 收集细胞(采用流式细胞仪检测时，应先固定细胞)，用 AO Stain Buffer(1×)清洗细胞 1 次，加入适量的AO StainBuffer(1×)重悬细胞，计数并调节细胞浓度至 106/ml。
2. 取适量的细胞悬液和 AO Stain，按照细胞悬液:AO Stain=19:1 的比例混合，轻轻混匀。如果采用荧光显微镜下观察，一般取 95μl 细胞悬液和 5μlAO Stain 混合即可。
3. 室温避光染色 15min，滴加于载玻片上并加盖玻片或上流式细胞仪分析。
4. 荧光显微镜下观察(激发滤光片波长 488nm，阻断滤光片波长 515nm)，计数并拍照。
染色结果
1. 正常细胞：细胞被均匀染成黄绿色荧光
2. 凋亡细胞：染色质浓缩，细胞核碎裂成点状，被染成大小与一、致密浓染的绿色颗粒
( 二) AO/EB 双染色
1. 收集细胞，用 AO Stain Buffer(1×)清洗细胞 1 次，加入适量的 AO Stain Buffer(1×)重悬细胞，计数并调节细胞浓度至 106 /ml。2. 取适量的细胞悬液和 AO Stain，按照细胞悬液:AO Stain=19:1 的比例混合，并加入适量 EB 染色液，轻轻混匀。如果采用荧光显微镜下观察，一般取 95μl 细胞悬液和 5μl AO Stain 混合即可。
3. 室温避光染色 15min，滴加于载玻片上并加盖玻片
4. 荧光显微镜滤光片 515nm 观察，计数并拍照。
染色结果
| AO 单独染色 | |
| 正常细胞 | 细胞被均匀染成黄绿色荧光 |
| 凋亡细胞 | 染色质浓缩，细胞核碎裂成点状，被染成大小不一、致密浓染的绿色颗粒 |
| AO/EB 双染色 | |
| 正常细胞 | 均匀染成绿色荧光 |
| 坏死细胞 | 细胞橘黄色荧光 |
| 凋亡细胞 | 染色质浓缩，细胞核碎裂，被染成大小不一、致密浓染的黄绿色颗粒或见胞质芽状突起 |
计算细胞凋亡率和死亡率
细胞死亡率=凋亡细胞/细胞总数×100%
细胞坏死率=坏死细胞/细胞总数×100%
注意事项1. 吖啶橙染色常与 EB 染色合用，可区分出正常细胞、凋亡细胞及坏死细胞。
2. 如有低温离心机进行离心效果更佳，同时应注意减少试剂暴露于强光下的时间。
3. 我司生产的生化试剂如无特殊标注，基本为非无菌包装，若用于细胞实验，请提前做好预处理。需低温保存的产品，一旦配成溶液，请分装保存，避免反复冻融造成的产品失效。
4. 本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床诊断或治疗，食品及化妆品等用途。请勿存放于普通住宅区。
5. 为了您的安全和健康，请穿好实验服并佩戴一次性手套和口罩操作。
6. 实验结果可由多种因素影响，相关处理只限于产品本身，不涉及其他赔偿。
备注：由于产品信息可能会有优化升级，请以实际收货标签信息为准。
