- 生化试剂
- ELISA检测
-
抗体蛋白
二抗生物素标记 过氧化物酶(HRP)标记 胶体金试剂 FITC荧光标记 RBITC荧光标记 二抗免疫血清 其它荧光标记二抗 藻红蛋白(PE)荧光标记 胶体金(Gold)标记 SAlexa Fluor荧光系列 碱性磷酸酶(AP)标记 别藻蓝蛋白(APC)荧光标记 其它标记 PE标记二抗 DyLight标记二抗 AU标记二抗 Biotin标记二抗 AMCA标记二抗 Texas Red标记二抗 TRITC标记二抗 HRP标记二抗 未标记二抗 Cy标记二抗 AbBox Fluor标记二抗内参抗体 小分子抗体抗体标记试剂盒细菌抗体蛋白病毒包装试剂杂交瘤融合筛选WB、IHC、ELISA相关试剂细胞培养试剂病原微生物抗原抗体假病毒抗体校准品其他抗原抗体标记的标签抗体病理级IHC抗体重组蛋白
- 细胞培养
- 实验耗材
- 仪器设备
- 生化试剂盒
- 小分子试剂
- 基质胶
-
斑马鱼产品
订货时间：周一至周五
订货Q Q：79688691
订货邮件：79688691@qq.com
同类产品满五赠一
基本信息-
产品名称杀稻瘟菌素 S溶液(10mg/ml,无菌)
-
保存温度-20℃ 勿反复冻融
-
有效期1年
产品简介Blasticidin S是来源于灰色链霉菌(Streptomyces griseochromogenes)的一种核苷类抗生素，中文名为灭瘟素S、杀稻瘟菌素S或稻瘟散，一般为盐酸盐。Blasticidin S常用于筛选携带bsr/BSD/bls基因(常标记为bsrr/bsdr/Blastr)质粒的哺乳动物稳定转染细胞株，具有快速而强效的作用模式，很低的抗生素浓度便能使未携带抗性基因的细胞迅速死亡。Blasticidin S具有快速而强效的作用模式，在很低的抗生素浓度下便能导致细胞快速死亡。大肠杆菌通常对50μg/ml的浓度敏感，而哺乳动物细胞对低至2-10µg/ml的浓度敏感。细胞死亡迅速发生，通常可在不到一周的时间内即可形成具有Blasticidin S抗性的稳定哺乳动物细胞系。
本产品10mg/ml包装配制在HEPES (pH7.4)缓冲溶液中，浓度为10mg/ml，经0.22μm滤膜过滤除菌，可以直接用于细胞培养。
操作步骤（仅供参考）1. 推荐工作浓度
推荐的作用于哺乳动物细胞的Blasticidin S浓度一般为1-50μg/ml，但最佳工作浓度需要通过剂量反应曲线来确定。
表1. 部分常见哺乳动物细胞的推荐工作浓度表
| 细胞名称 | 细胞类型 | Blasticidin S浓度 |
| A549 | Human lung cancer | 10μg/ml |
| CHO | Chinese hamster ovarian | 5-10μg/ml |
| HEK293 | Human embryonic kidney | 5-15μg/ml |
| HeLa | Human cervical cancer | 2.5-10μg/ml |
| HepG2 | Human hepatocellularcarcinoma | 4-5μg/ml |
| Neuro2a | Mouse neuroblasts | 30μg/ml |
| HT1080 | Human fibrosarcoma | 5-20μg/ml |
| MCF-7 | Human breast cancer | 2-5μg/ml |
| THP-1 | Human monocytes | 10μg/ml |
| B16 | Mouse melanoma tumor | 3-10µg/ml |
2. Blasticidin S剂量反应曲线的确定
Blasticidin S的有效筛选浓度与细胞类型、生长状态、细胞密度、细胞代谢及细胞所处细胞周期等因素相关。为了筛选到具有Blasticidin S抗性的稳定细胞株，需要确定杀死未转染/感染宿主细胞所需的Blasticidin S的最低浓度，可以通过实验来确定适合自身实验体系的剂量反应曲线(dose-response curve or kill curve)。
a. 第一天：将正常的细胞按照约25%的密度接种在适宜的细胞培养板上，于细胞培养箱内培养过夜。
b. 第二天：将培养过夜的细胞培养基换成新鲜的含不同浓度Blasticidin S的筛选用培养基，Blasticidin S浓度可以设置为0、2、4、6、8和10μg/ml等，每个浓度设置2个复孔，于细胞培养箱内继续培养。注：也可以根据自己的实验体系，设置不同的浓度梯度。
c. 每3-4天更换新鲜的筛选培养基，并观察存活细胞的比例。
d. 选择在加入Blasticidin S后7-10天杀死大多数细胞的最低浓度为最佳筛选浓度。
3. 哺乳动物稳定表达细胞株的筛选
转染含有bsr或BSD基因的质粒或者感染含有该基因的病毒后，即可筛选稳定表达株。
a. 细胞转染或感染48小时后，将细胞置于含有适当浓度Blasticidin S的新鲜培养基中培养，此为处理组。注意：当细胞处于分裂活跃期时，抗生素作用最明显。细胞过于密集，抗生素产生的效力会明显下降，所以细胞的密度最好不超过25%。建议同时做一个正常细胞的对照组。转染或感染48小时后，如果细胞过密也可以消化后重新接种细胞，培养过夜后即可进行Blasticidin S筛选。
b. 每3-4天去除培养基，加入含Blasticidin S的新鲜培养基。
c. 筛选7-10天后，对照组正常细胞应该100%死亡，处理组中存活的细胞为表达bsr或BSD基因的细胞。然后根据实验目的进行多克隆或单克隆细胞的筛选。根据宿主细胞种类和转染/筛选效率，集落形成可能需要一周或更多的时间。
d. 克隆形成后，挑取并转移5-10个抗性克隆到35mm细胞培养板中，加入选择培养基维持培养7天。随后用细胞毒性实验进行检测。
注意事项1. 本产品对人体有急性毒性，操作时请特别小心，并确保有效防护以避免直接接触人体或吸入体内。
2. 我司生产的生化试剂如无特殊标注，基本为非无菌包装，若用于细胞实验，请提前做好预处理。需低温保存的产品，一旦配成溶液，请分装保存，避免反复冻融造成的产品失效。
3. 本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床诊断或治疗，食品及化妆品等用途。请勿存放于普通住宅区。
4. 为了您的安全和健康，请穿好实验服并佩戴一次性手套和口罩操作。
5. 实验结果可由多种因素影响，相关处理只限于产品本身，不涉及其他赔偿。
备注：由于产品信息可能会有优化升级。请以实际收货标签信息为准。
