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基本信息-
产品名称DEAE-Dextran细胞转染试剂盒
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保存温度按试剂盒各组分温度保存
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有效期6个月
产品简介外源基因导入真核细胞的方法有很多种，如磷酸钙转染法、DEAE-葡聚糖
(Dextran)转染法、脂质体法、电穿孔法、显微注射法等，DEAE-葡聚糖转染法
的原理是带正电荷的DEAE-葡聚糖与带负电的核酸的磷酸骨架相互作用，形成
复合物，该复合物通过细胞内吞噬作用使DNA转导进入细胞核。
本品DEAE-Dextran细胞转染试剂盒(DEAE-DextranCellTransfection
Kit)适用于瞬时转染(TransientTranfection)，不宜用于筛选稳定表达细胞株，这
是因为DEAE-dextran在较高浓度作用较长时间会对细胞产生一定毒性；氯喹的
加入可以抑制溶酶体对外源DNA的降解，从而提高转染效率，但对于具体的细
胞、具体的培养条件，如需获得更加理想的转染效率，须自行摸索上述各种转
染方法，找出优化的转染方法，CHO、DUKX、BⅡ等细胞也可以通过甘油、
DMSO进行热休克处理以提高转染效率。
产品组成| 组分 | 100T | 200T | 保存温度 |
| 试剂(A):DEAE-Dextran Solution | 10ml | 20ml | -20℃ |
| 试剂(B):PBS(10×) | 50ml | 100ml | 2-8℃ |
| 试剂(C):Chloroquine Solution | 1.8ml | 3.5ml | 2-8℃ |
操作步骤（仅供参考）自备材料
1. 胰蛋白酶消化液
2. 完全培养基
3. 无菌水
操作步骤(仅供参考)
(一)常规转染：
1. 配制PBS(1×)：用无菌水将PBS(10×)稀释至1×，即可。
2. 在转染前24h用胰蛋白酶消化培养细胞，取适量对数期细胞转移至新的
培养器皿中，待细胞密度达50～70%即可进行转染；后续操作步骤均按6孔板
计算，如果转染器皿不同，请按比例自行调节用量。
3. 弃培养液，用PBS(1×)清洗细胞2~3次，吸尽残液。
配制转染液:对于6孔板，按照下表依次加入8μl DEAE-Dextran Solution，
2μg DNA以及适量的PBS(1×)，使其总体积为170μl，即为DEAE-Dextran-DNA
PBS转染液，用移液器轻轻吹打混匀，但不宜采用离心或Vortex等剧烈方式。
| 试剂 | 6孔板 | 24孔板 | 60mm培养皿 | 100mm培养皿 |
| DEAE-Dextran Solution | 8μl | 2μl | 17μl | 28μl |
| DNA | xμl(2μg) | xμl(0.5μg) | xμl(4μg) | xμl(7μg) |
| PBS(1×) | (162-x)μl | (40-x)μl | (325-x)μl | (540-x)μl |
| 总体积 | 170μl | 42μl | 342μl | 568μl |
| 细胞培养液 | 1.7ml | 0.4ml | 3.5ml | 6ml |
| Chloroquine Solution(可选) | 17μl | 4μl | 35μl | 60μl |
备注：对于六孔板中一个孔的细胞，DNA可以在1～3μg的范围内进行适当调节，最佳的
转染条件，因具体的细胞和培养条件而定，可以在上述推荐范围内自行优化转染条件；对
于其它培养板或培养器皿，试剂的用量可大致按照细胞培养面积按比例换算。
5. 转染：把170μl转染液滴加到细胞表面，轻轻晃动6孔板，使其与细胞
表面充分接触，37℃孵育20～40min，观察细胞至皱缩变圆为止。
6. 参考上表，每孔缓慢加入1.7ml细胞培养液(约为DEAE-Dextran-DNA
PBS转染液体积的10倍)。
7. 可选步骤：参考上表，每孔加入17μl Chloroquine Solution，亦可和上一
步骤中1.7ml细胞培养液预先混合后一起加入。
8. 培养不超过2h或在出现明显的细胞毒性前，更换新鲜培养液继续培养，通常转染后48～72小时可以检测转染效果。
(二)预处理转染：
1. 配制PBS(1×)：用无菌水将PBS(10×)稀释至1×，即可。
2. 在转染前24h用胰蛋白酶消化培养细胞，取适量对数期细胞转移至新的
培养器皿中，待细胞密度达50～70%即可进行转染，后续操作步骤均按6孔板
计算，如果转染器皿不同，请按比例自行调节用量。
3. 弃培养液，用PBS(1×)清洗细胞2~3次，吸尽残液。
4. 配制转染液:对于6孔板，按照下表依次加入0.1mlDEAE-Dextran
Solution、0.9mlPBS(1×)，使其总体积为1ml，即为DEAE-Dextran工作液。
5. 预转染：对于6孔板，把1ml转染液滴加到细胞表面，轻轻晃动6孔
板，使其与细胞表面充分接触，37℃孵育10min。
6. 洗涤：弃液，用PBS(1×)轻轻清洗2次，注意防止细胞脱落。
7. 弃洗涤液，参考下表，每孔缓慢均匀加入162μl DNA工作液。
8. 37℃孵育30min，参考下表，每孔缓慢加入1.7ml细胞培养液(约为
DNA工作液体积的10倍)。
| 试剂 | 6孔板 | 24孔板 | 60mm培养皿 | 100mm培养皿 |
| DEAE-Dextran Solution | 0.1ml | 25μl | 0.2ml | 0.4ml |
| PBS(1×) | 0.9ml | 225μl | 1.8ml | 3.6ml |
| DEAE-Dextran工作液 | 1ml | 250μl | 2ml | 4ml |
| DNA | xμl(2μg) | xμl(0.5μg) | xμl(4μg) | xμl(7μg) |
| PBS(1×) | (162-x)μl | (40-x)μl | (325-x)μl | (540-x)μl |
| DNA工作液 | 162μl | 40μl | 325μl | 540μl |
| 细胞培养液 | 1.7ml | 0.4ml | 3.5ml | 6ml |
| Chloroquine Solution(可选) | 17μl | 4μl | 35μl | 60μl |
备注：对于六孔板中一个孔的细胞，DNA可以在1～3μg的范围内进行适当调节；最佳的转染条件因具体的细胞和培养条件而定，可以在上述推荐范围内自行优化转染条件，
对于其它培养板或培养器皿，试剂的用量可大致按照细胞培养面积按比例换算。
9. 可选步骤：参考上表，每孔加入17μl Chloroquine Solution，亦可和上一
步骤中1.7ml细胞培养液预先混合后一起加入，培养不超过4h或在出现明显的
细胞毒性前，更换新鲜培养液继续培养，通常转染后48～72小时可以检测转染
效果。
注意事项1. 注意无菌操作，尽量避免污染，同时DNA不应含有蛋白和酚。
2. 休克处理某些细胞系会使转染效率大大提高，但应注意甘油暴露过久易
导致细胞死亡。
3. 转染12～24h后，可以加入终浓度为10mmol/L的丁酸钠溶液，可以提
高病毒滴度。
4. 如果转染效率低下，有可能是过多细胞死亡所致，应考虑减少DEAE
Dextran的用量或作用时间，或者减少氯喹作用时间。
5. 支原体污染细胞，易导致转染不稳定。
7. 本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床诊断或治疗，食品及化妆品等用途。请勿存放于普通住宅区。
8. 为了您的安全和健康，请穿好实验服并佩戴一次性手套和口罩操作。
9. 实验结果可由多种因素影响，相关处理只限于产品本身，不涉及其他赔偿。
备注：由于产品信息可能会有优化升级。请以实际收货标签信息为准。
