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基本信息-
中文名称5×考马斯亮蓝G-250（蛋白定量用,非无菌）
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保存温度2-8℃ （开封使用后请密封保存）
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有效期9个月
产品简介考马斯亮蓝G-250染料，在酸性溶液中与蛋白质结合，使染料的最大吸收峰的位置（Imax），由465nm变为 595nm，在一定的浓度范围内，测定的吸光度值 A595 与蛋白质浓度成正比。Bradford法测定蛋白浓度不受绝大部分样品中的化学物质的影响，样品中巯基乙醇的浓度可高达1M，二硫苏糖醇的浓度可高达5mM，但受略高浓度的去垢剂影响，需确保SDS 的浓度低于0.1%，TritonX-100低 0.1%，Tween 20, 60, 80 低于0.06%。含去垢剂的样品推荐使用BCA蛋白浓度测定试剂盒。
操作步骤（仅供参考）自备试剂：PBS、BSA 标准品(5mg/mL)
一．微孔酶标仪法
1. 完全溶解蛋白标准品，取10μL，稀释至250μL，使终浓度为0.2mg/mL。待测蛋白样品在什么溶液中，标准品也宜用什么溶液稀释。但是为了简便起见，也可以用0.9%NaCl 或PBS稀释标准品。
2. 5×G250 染色液使用前请颠倒3-5次混匀，取1mL 5×G250染色液，加入4mL双蒸水，混匀成1×G250 染色液，此1×G250 染色液可在4℃保存一周。
3. 将标准品按 0,2,4,6,8,12,16,20 微升分别加到96孔板中，加PB 稀释液补足到20微升。
4. 将样品作适当稀释（最好多做几个梯度，如作 2 倍、4 倍、8倍稀释），加20微升到96孔板的样品孔中。由于移液器在取小量时的误差，标准线前面的点可能不很准确，所以尽可能的让样品点落在标准线1/2后。
5. 各孔加入200微升稀释后的1×G250染色液，室温放置3-5 分钟。
6. 用酶标仪测定A595，或560-610nm之间的其它波长的吸光度。
7. 根据标准曲线计算出样品中的蛋白浓度。
二．分光光度计法
如无酶标仪，染色反应可在离心管中进行，反应液混匀后加入比色皿中，使用分光光度计测定吸光值。
步骤如下：
1. 取八支（或者更多）干净的10mL 离心管，标记上号。
2. 取100μLBSA 加入PBS 2.4mL稀释至终浓度为0.2mg/mL。
3. 5×G250染色液使用前请颠倒3-5次混匀，取10mL 5×G250染色液，加入40mL双蒸水，混匀成 1×G250 染色液，此1×G250染色液可在 4℃保存一周。
4. 按下表加入试剂(以每孔5mL计，多余的用来清洗比色皿)
5. 反应3分钟后测OD值。为了实验的准确性，可每间隔2分钟加一管染色液，每间隔2分钟测一管OD 值。
如下表：
注意事项1. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
2. 本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床诊断或治疗，食品及化妆品等用途。请勿存放于普通住宅区。
3. 实验结果可由多种因素影响，相关处理只限于产品本身，不涉及其他赔偿。
备注：由于产品信息可能会有优化升级，请以实际收货标签信息为准。
