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基本信息-
中文名称RIPA裂解液(强)
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保存温度-20℃
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有效期1年
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应用裂解细胞提取总蛋白质,主要用于Western,免疫沉淀
产品简介多种成分均可以从细胞中提取总蛋白，例如 Triton、SDS、NP-40 等，RIPA裂解液(强)(Enhanced RIPA Lysis Buffer )是采用一种经典的细胞组织快速裂解，并获得总蛋白的裂解液，其裂解强度大于 NP-40 裂解液、RIPA 裂解液(中)，所获得的蛋白质可以用于Western，免疫沉淀(Immunol Precipitation，IP)等。
本品Enhanced RIPA Lysis Buffer 主要由 Tris 、NP-40、sodium deoxycholate等组成，并含有多种蛋白酶抑制剂成分，可以有效抑制蛋白的降解，并维持原有的蛋白间相互作用。该试剂仅用于科研领域，不适用于临床诊断或其他用途。
产品组成| 名称 | 规格 | 保存 |
| 试剂(A): Enhanced RIPA Lysis Buffer | 100ml | 2-8℃ |
| 试剂(B): PMSF 溶液(100mM) | 1.5ml | -20℃ |
操作步骤（仅供参考）配制含有 PMSF 的 Enhanced RIPA Lysis Buffer：取 Enhanced RIPA Lysis Buffer 置于室温平衡，加入 PMSF，使其终浓度为 1mM，临用前配制，不可长期保存。
(一)贴壁细胞
1. 去除贴壁细胞的培养液，用 PBS、NS 或无血清培养液清洗 1 次，低速离心，弃上清，留取沉淀。
2. 6 孔板每孔加入 150～250μl 含有 PMSF 的 Enhanced RIPA Lysis Buffer，用手指轻弹细胞，使其松散，移液器轻轻吹打，使裂解液和细胞充分接触，置于冰上或4℃裂解，通常裂解液作用于细胞 1～3s 内细胞就会被裂解，通常 6 孔板每孔细胞加入150μl 裂解液已经足够，但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到200～250μl。
3. 10000～12000g 4℃离心 5～10min(如无低温离心机，室温离心亦可)，取上清。
4. 后续的 SDS-PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。
(二)悬浮细胞
1. 低速离心悬浮细胞，弃上清，用 PBS、NS 或无血清培养液清洗1 次，离心留取沉淀。
2. 下同贴壁细胞 2～4 操作步骤。
(三)组织样本
1. 组织剪碎，越小越好。
2. 放置液氮或超低温冰箱中冷冻 30min，用液氮研磨，尽量控制在1～2min 之内以减少蛋白的降解，每 20mg 组织加入 150～250μl 含有 PMSF 的Enhanced RIPA Lysis Buffer，冰上或 4℃裂解 15～30min。
3. 亦可按照每 20mg 组织加入 150～250μl 含有 PMSF 的 Enhanced RIPA Lysis Buffer用玻璃匀浆器或组织研磨器匀浆，直至充分裂解，该过程尽量控制在2～5min 之内，以减少蛋白的降解。
4. 下同贴壁细胞 2～4 操作步骤。
注意事项1. 去除贴壁细胞的培养液后，如果血清中的蛋白没有干扰，可以不用清洗。
2. 如果裂解不充分可以适当增加裂解液的用量，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量。
3. 如果细胞量较多，必需分装成 50～100 万细胞/离心管，然后再裂解，大团的细胞较难裂解充分，而少量的细胞由于裂解液容易和细胞充分接触，相对比较容易裂解充分。
4. 如果组织样品本身非常细小，可以适当剪切后直接加入裂解液裂解，通过强烈Vortex使样品裂解充分，然后同样离心取上清用于后续实验，直接裂解的优点是比较方便，不必使用匀浆器，缺点是不如使用匀浆器裂解的充分。
5. Enhanced RIPA Lysis Buffer 含有特殊成分，在低温情况下有可能出现浑浊现象，可 37℃水浴促其溶解，不影响使用效果；溶解时间不易过长，避免成分失效，4度保存即可，长期不用亦可-20℃保存。
6. PMSF 溶液可置 4℃保存 1~2 周，-20℃可保存 1 年以上，室温放置2 天即可能失效。
7. 裂解产物中经常会出现一小团透明胶状物，属正常现象，该透明胶状物为含有基因组DNA 等的复合物，在不检测和基因组 DNA 结合特别紧密的蛋白的情况下可以直接离心取上清用于后续实验；如果需要检测和基因组结合特别紧密的蛋白，则可以通过超声处理打碎打散该透明胶状物，随后离心取上清用于后续实验。
8. 细胞裂解的操作步骤，应置于冰上或 4℃进行。
9. 试剂开封后请尽快使用，以防影响后续实验效果。
10. 本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床诊断或治疗，食品及化妆品等用途。请勿存放于普通住宅区。
11. 为了您的安全和健康，请穿好实验服并佩戴一次性手套和口罩操作。
12. 实验结果可由多种因素影响，相关处理只限于产品本身，不涉及其他赔偿。
备注：由于产品信息可能会有优化升级。请以实际收货标签信息为准。
