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斑马鱼产品
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同类产品满5赠1
- CAS：108964-32-5
- 分子式：C44H47N3O24
- 分子量：1001.85
- 纯度：≥95%（HPLC）
基本信息-
中文名称Fura-2 AM 钙离子荧光探针
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中文名称Fura-2 AM
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CAS108964-32-5
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分子式C44H47N3O24
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分子量1001.85
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性状黄色或橙黄色粉末
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纯度≥95%（HPLC）
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保存温度-20℃（该产品在溶液状态不稳定，建议您现用现配，即刻使用）
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有效期1年
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应用荧光钙离子指示剂。对Ca2 +的选择性高于其他二价阳离子Mg2 +，Zn2 +，Fe2 +和Mn2 +。用于确定细胞内Ca2 +浓度。也可提供用于增溶FURA-2AM的F-127。
操作方法（仅供参考）使用方法（以50µg为例）
母液配制：用49.9µl 二甲基亚砜（DMSO）溶解50µg的Fura 2-AM粉末配制成1mmol/l的Fura 2-AM母液。-20℃避光密封保存。使用前根据实验需要稀释成合适的浓度。
如果想配其他浓度母液的话，请按照如下公式进行操作：*B=49.9/A；其中A为Fura 2-AM的母液浓度（mmol/l）；B为DMSO的体积（µl）。
1. 用HBSS溶液稀释1-5 mmol/l 的Fura 2-AM母液，配制成1-5 µmol/l 的Fura 2-AM工作液。（此浓度仅供参考，请根据具体实验要求自行调整）例如：1 mmol/l 母液配制1ml浓度为5µmol/l工作液的方法：用1ml HBSS 溶液稀释5µl母液即可。如果Fura 2-AM进入细胞的效果不好，可使用Pluronic®F-127，后者可以防止Fura 2-AM在缓冲液里聚合并能促进其进入细胞。*Pluronic®F-127先用DMSO溶解至浓度为20%（W/V），然后根据实验需要直接加入Fura 2-AM工作液中至终浓度为0.04-0.05%（此浓度仅供参考，请根据具体实验要求自行调整）。
2. 取出预培养的细胞，除去培养基，使用HBSS溶液洗涤细胞3次。如果使用含血清的培养基，血清中的酯酶会分解AM体，从而降低Fura 2-AM进入细胞的效果。另外含有酚红的培养基会使本底值略微偏高，所以加工作液之前需尽量去除培养基残留。
3. 加入Fura 2-AM工作液，溶液量以覆盖细胞为准。
4. 37℃细胞培养箱孵育10-60 分钟，除去Fura 2-AM工作液。关于孵育的时间，如果首次做实验不能确定，建议先孵育30分钟，看荧光效果：如果细胞死亡较多，缩短时间；荧光强度太弱，延长时间。
5. 用HBSS溶液洗涤细胞3次，以充分去除残留的Fura 2-AM工作液。然后加入HBSS溶液覆盖细胞。
6. 37℃培养箱孵育约20-30分钟，以确保AM体在细胞内的完全去酯化作用。如果细胞内酯酶活性较低，建议严格按照此操作进行；酯酶活性高的细胞实验，可以忽略此步。
7. 用流式细胞仪或其它设备检测细胞，激发波长380nm（Fura 2）和340nm（钙离子-Fura 2），发射波长510 nm。
计算公式
胞内游离Ca2+浓度=Kd （F0/Fs ）（R-Rmin ）/（Rmax-R）*式中Kd 值为224 nmol/l，F0和Fs分别代表Ca2+为零及饱和状态下测得的荧光强度，R为实验观察到的荧光比值，Rmax 和Rmin 分别为最大和最小的荧光比值。*标记的条件因细胞种类而异，在每次实验前，请先确定最佳条件。以上方法仅供参考。
注意事项1. 试剂容易吸潮，从冰箱取出后，请确认在干燥的环境放至室温后再开封。由于试剂极其微量，开封前，请轻弹管壁几次，以保证粉末落入管底。
2. 第一次使用时, 建议母液即配即用。试剂溶解后尽可能在短时间内使用，以保证实验效果。
3. 溶解液DMSO需要保证新鲜无水，否则将会导致AM体水解，使荧光染料无法进入细胞，影响实验效果。
4. 母液遇水极易分解，如果不能一次用完，建议分装保存，例如分装成5μl/管，用封口膜封口，并用铝箔纸包裹，放在一个密闭性能好的塑料袋中，并放入一包干燥剂，在≤-20℃密封避光保存。
5. 建议您在正式实验前先摸索一下细胞量、钙离子荧光探针的终浓度、培养时间等，找到最佳实验条件。
6. 本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床诊断或治疗，食品及化妆品等用途。请勿存放于普通住宅区。
7. 为了您的安全和健康，请穿好实验服并佩戴一次性手套和口罩操作。
8. 实验结果可由多种因素影响，相关处理只限于产品本身，不涉及其他赔偿。
备注：由于产品信息可能会有优化升级，请以实际收货标签信息为准。
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