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基本信息-
中文名称5x蛋白上样缓冲液(含DTT)
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英文名称SDS-PAGE loading buffer，5x(with DTT)
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保存温度-20℃ 勿反复冻融
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有效期1年
产品简介蛋白上样缓冲液主要由 TRIS、SDS、溴酚蓝、还原剂等组成。SDS 可与蛋白质结合使蛋白质-SDS 复合物上带有大量的负电荷，这使蛋白质本身的电荷完全被SDS 掩盖，消除了各种蛋白质本身电荷的差异；SDS 还可以断开分子内和分子间的氢键，破坏蛋白质分子的二级结构和三级结构。还原剂可以断开半胱氨酸残基之间的二硫键，破坏蛋白质结构，消除了蛋白结构之间的差异，最终无电荷及结构上差异的蛋白（亚单位），电泳速度只是与其分子量大小有关。溴酚蓝作为电泳指示剂，可大概指示电泳结束的时间。
本品5x蛋白上样缓冲液(含DTT)即 SDS-PAGE Sample LoadingBuffer(5×,with DTT)，是一种经过改良的以溴酚蓝为染料的 5 倍浓缩的蛋白上样缓冲液。本产品含少量 DTT，但不含有毒物质β-巯基乙醇，使蛋白上样操作相对安全健康。
操作步骤（仅供参考）1. 在室温或不超过 37℃的水浴中溶解5x蛋白上样缓冲液(含DTT)，水浴溶解后立即室温存放，尽量避免长时间置于水浴中。使用完毕后应置于-20℃保存。
2. 取适量的蛋白样品和SDS-PAGE Sample Loading Buffer(5×)按4:1 混合，充分混匀。如 40μl 蛋白样品加入 10μl 上样缓冲液 (5 倍稀释)来使用。如果蛋白样品浓度过高，可用双蒸水稀释。
3. 95℃水浴加热 5～10min，以充分变性蛋白。
4. 冷却到室温后，经 10000~14000rpm 离心 2~5min，取上清直接上样电泳。
5. 通常电泳至蓝色染料到达 PAGE 胶的底部附近即可停止。
注意事项1. SDS-PAGE Sample Loading Buffer(5×)中含少量 DTT，有轻微刺激性气味。
2. SDS-PAGE Sample Loading Buffer(5×)必须完全溶解后再使用。建议根据使用量和频率分装冻存，应避免反复冻融。
3. 本产品用于蛋白变性时，建议 95ºC 水浴或 PCR 仪加热 5 分钟，温度过高(如100ºC)或时间过长(如超过 15 分钟)，有可能会导致蛋白降解或上样缓冲液中指示剂的颜色异常。
4. 本产品含有溴酚蓝指示剂，pH 受温度影响，颜色可能有所不同；低温冻存条件下，呈深棕色~深蓝色凝固状态，不影响正常使用。
5. 本产品稀释至 1X 后可以直接用于细胞或组织样品的裂解。
6. 加热前通常会发现蛋白样品内有粘稠的半透明状物体，通常在本上样缓冲液内95℃水浴加热 8~10 分钟后可使该粘稠的半透明状物体消失，便于后续的上样操作。如果起始时细胞或组织的用量较大，基因组 DNA 含量较高，加热 5~10 分钟后有可能仍然比较粘稠或者有粘稠状的半透明物体，此时需要再加热 5-10 分钟或者加入适量1X的蛋白上样缓冲液后再加热 3~5 分钟。充分加热后一方面可以使结合在基因组DNA上的蛋白充分释放，同时会导致基因组 DNA 的部分断裂从而使粘稠感消失，这样就不会影响后续的上样操作了。适当超声或使用 1ml 注射器反复抽吸也可以打断基因组DNA从而使粘稠感消失。
7. 本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床诊断或治疗，食品及化妆品等用途。请勿存放于普通住宅区。
8. 为了您的安全和健康，请穿好实验服并佩戴一次性手套和口罩操作。
9. 实验结果可由多种因素影响，相关处理只限于产品本身，不涉及其他赔偿。
备注：由于产品信息可能会有优化升级。请以实际收货标签信息为准。
