1. 快速高效，根除效率近 100%：该系列产品主要成分为一种多肽类表面活性剂，使用后即可几乎永久有效地消除培养细胞中的支原体。
2. 不含抗生素，无耐药反应：该系列产品特异性地与支原体膜结合、通过改变支原体膜的通透性从而杀死支原体。因此支原体产生耐药的可能性极低。
3. 细胞毒性小：该系列产品不能穿过真核细胞的细胞膜，因此不会改变细胞的任何特性，支原体被清除后，细胞后续的生长增殖几乎无影。
4. 使用十分便捷：该系列产品为即用型无菌溶液，只需将细胞培养液换成含有本产品的培养液即可，无须降低血清浓度。

一、支原体去除工作液的准备
对于细胞样品，根据所需细胞培养液量，将本产品和新鲜细胞培养液按1:1000的比例混匀，例如取10μl本产品加入10ml新鲜的细胞标准培养液(标准培养液中含10%血清也是可以的)，混匀即得10ml支原体去除工作液。注：支原体去除工作液需现配现用，不可保存后使用。对于病毒样品，使用无血清细胞培养液配制去除工作液，稀释比例也有所不同，具体参见如下相关步骤。
二、对贴壁细胞支原体的去除
1. Day 1：消化贴壁细胞，计数确定细胞量，加入适量支原体去除工作液，正常条件接种培养。注：细胞量以贴壁第二天细胞能铺满培养皿或培养瓶底60%以上为宜。
2. Day 3：用支原体去除工作液进行换液或者再次进行传代处理。
注1：如果细胞达到传代的密度，则进行第二次传代处理；如果细胞生长较缓慢，不宜传代，则更换新鲜的支原体去除工作液继续处理；若细胞的形态受到了影响，则适当加大支原体去除试剂的稀释比例继续作用。
注2：一般情况下，连续处理两次即可成功清除支原体，可以根据支原体污染的严重程度及细胞的状态调整处理次数和作用时间。
3. 取细胞培养上清，使用支原体检测方法检测支原体是否彻底清除。
4. 支原体彻底清除后，更换成标准细胞培养液培养细胞。支原体去除试剂plus无须长期维持。
三、对悬浮细胞支原体的去除
1. Day1：将培养的悬浮细胞转移至离心管，1000×g离心5分钟，去上清，用适量支原体去除工作液重悬细胞。计数确定细胞量，加入适量支原体去除工作液，正常条件接种培养。
2. Day3：用支原体去除工作液进行换液。
注：一般情况下，连续处理两次即可成功清除支原体，用户可以根据支原体污染的严重程度及细胞的状态调整处理次数和作用时间。
3. 取细胞培养上清，使用原体检测方法检测支原体是否彻底清除。
4. 支原体彻底清除后，更换成标准细胞培养液培养细胞。支原体去除试剂plus无须长期维持。
四、对无包膜病毒支原体的去除
1. 配制支原体去除工作液时，使用无血清细胞培养液，稀释比例为1:800。例如取12.5μl本产品加入10ml无血清细胞培养液，混匀即得10ml支原体去除工作液。
2. 将病毒溶液和支原体去除工作液按1:10的比例，轻轻涡旋混匀。例如100μl病毒溶液加入1ml支原体去除工作液。此时“病毒-支原体去除试剂plus混合物”体积约为1.1ml。注：病毒溶液中的胎牛血清浓度越少，支原体去除效果越好。
3. 室温孵育2小时。
4. 使用细胞培养液对“病毒-支原体去除试剂plus混合物”进行10倍稀释以终止支原体去除试剂plus的作用，如1.1ml“病毒-支原体去除试剂plus混合物”中加入9.9ml细胞培养液；也可以直接将“病毒-支原体去除试剂plus混合物”加入待感染的细胞中进行细胞感染，只需最终总培养液体积是“病毒-支原体去除试剂plus混合物”的10倍即可。
注：在“病毒-支原体去除试剂plus混合物”的涡旋混匀过程中，确保混合物充分润湿了离心管的整个内表面，避免局部有支原体污染区域没有被处理到。
五、对包膜病毒支原体的去除
1. 配制支原体去除工作液时，使用无血清细胞培养液，稀释比例为1:4000。例如取2.5μl本产品加入10ml无血清细胞培养液，混匀即得10ml支原体去除工作液。
2. 将病毒溶液和支原体去除工作液按1:10的比例，轻轻涡旋混匀。例如100μl病毒溶液加入1ml支原体去除工作液。此时“病毒-支原体去除试剂plus混合物”体积约为1.1ml。注：病毒溶液中的胎牛血清浓度越少，支原体去除效果越好。
3. 室温孵育30分钟。
4. 使用细胞培养液对“病毒-支原体去除试剂plus混合物”进行10倍稀释以终止支原体去除试剂plus的作用，如1.1ml“病毒-支原体去除试剂plus混合物”中加入9.9ml细胞培养液；也可以直接将“病毒-支原体去除试剂plus混合物”加入待感染的细胞中进行细胞感染，只需最终总培养液体积是“病毒-支原体去除试剂plus混合物”的10倍即可。
注1：在“病毒-支原体去除试剂plus混合物”的涡旋混匀过程中，确保混合物充分润湿了离心管的整个内表面，避免局部有支原体污染区域没有被处理到。
注2：本病毒溶液中支原体的去除过程，可多次用于病毒收获液中的支原体去除，以确保支原体已完全去除。
六、对其它支原体污染的试剂的处理
处理方式同“对无包膜病毒支原体的去除”。

1. 尽管支原体去除试剂plus可以彻底去除支原体，但仍可能由于清除不彻底、后续操作、使用试剂的污染及环境等因素造成再次污染，所以建议细胞培养期间，每周进行一次支原体检测，冻存细胞复苏后也尽快进行支原体检测。

2. 支原体去除试剂plus是通过生物物理的方法与支原体膜结合来杀灭支原体的，必须直接接触支原体才能有效杀除，因此作用于悬浮细胞时只需更换含有本产品的细胞培养液即可。对于贴壁细胞，建议在对细胞进行消化和传代处理即细胞处于悬浮状态时就加入本产品，这种方式下支原体的去除效果比细胞贴壁后再加入更好，对细胞的状态影响也更小。

3. 支原体去除试剂plus在作用过程中可能会对细胞的活力和形态产生一定的影响，为使细胞后续正常生长，需保证一定的细胞数量，例如贴壁细胞密度在60%以上为宜。以6cm培养皿为例，悬浮细胞的数量在30万个以上为佳，但是细胞量也不宜过大，否则可能会降低本产品的效果。不同细胞对本产品的耐受程度有所差异，可以根据结果适当调整细胞量。作用期间应密切观察细胞的状态，如果出现细胞变形、生长缓慢等现象，可以更换成标准培养液终止作用，或者将支原体去除试剂plus按照1:1500甚至更高的稀释倍数稀释后使用，但降低使用浓度后的作用次数和作用时间可能需要增加和延长。

4. 支原体检测阳性的细胞转阴时间与细胞种类、细胞状态、及支原体种类、支原体污染严重程度等密切相关，经支原体去除试剂plus处理后转阴的细胞，建议再巩固作用一次，以彻底的清除支原体、防止复阳。例如我们实测悬浮细胞MOLM-13，仅需处理一次、作用两天，细胞即可转阴、且转阴后的状态非常稳定，而HeLa细胞在处理一次后也转阴，但是传代后可能会复阳，处理两次后转阴的状态则很稳定。

5. 经支原体去除试剂plus消除支原体后的细胞可能仍能检测出支原体的存在。一方面，支原体去除试剂plus消除支原体的过程中支原体膜溶解，支原体的DNA会释放存在于培养液中，引起支原体核酸检测呈假阳性，随着细胞的继续培养、细胞外的DNA会慢慢被水解，建议经支原体去除试剂plus杀除后的细胞在继续正常传代培养3到4代后再进行支原体检测；另一方面，支原体去除试剂plus的去除功效会受细胞密度、细胞状态等很多因素的影响，第一次去除时可能不能完全消除，甚至会因为操作等不当造成细胞的再次污染，此时可以待细胞状态稳定后进行第二次去除。使用支原体检测试剂可以避免核酸检测出现的假阳性。

6. 进行病毒支原体去除前，首先要检测待感染的宿主细胞系是否有支原体污染，确保所用的宿主细胞无支原体污染。

7. 包膜病毒(Enveloped viruses)外层的脂质膜成分与支原体膜相似，也是支原体去除试剂plus结合的对象，根据使用支原体去除试剂plus的浓度和作用时间，这些病毒也极易被支原体去除试剂plus去除，为了能够彻底去除支原体同时保证病毒的感染能力，起始病毒滴度应高于106 TCID50 (50% Tissue Culture Infectious Dose)。而对于无包膜病毒(Non-enveloped viruses)支原体的去除，病毒的滴度不会影响去除效果。

8. 本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床诊断或治疗，食品及化妆品等用途。请勿存放于普通住宅区。

9. 为了您的安全和健康，请穿好实验服并佩戴一次性手套和口罩操作。

10. 实验结果可由多种因素影响，相关处理只限于产品本身，不涉及其他赔偿。 

备注：由于产品信息可能会有优化升级。请以实际收货标签信息为准。

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