1. 快速高效，根除效率近 100%：该系列产品主要成分为一种多肽类表面活性剂，使用后即可几乎永久有效地消除培养细胞中的支原体。
2. 不含抗生素，无耐药反应：该系列产品特异性地与支原体膜结合、通过改变支原体膜的通透性从而杀死支原体。因此支原体产生耐药的可能性极低。
3. 细胞毒性小：该系列产品不能穿过真核细胞的细胞膜，因此不会改变细胞的任何特性，支原体被清除后，细胞后续的生长增殖几乎无影。
4. 使用十分便捷：该系列产品为即用型无菌溶液，支原体去除试剂使用时细胞和去除试剂无需任何预处理，只需在常规的细胞培养过程中，将细胞培养液换成含有本产品的培养液，使用1-3次、作用2-5天即可有效去除支原体。

一、对贴壁细胞支原体的去除
1. 支原体污染细胞的准备：贴壁细胞消化、计数，用含有5%胎牛血清的标准培养液将细胞密度调整为5000-50000个/ml，备用。
2. 在6cm培养皿中加入2.8ml含有5%胎牛血清的标准培养液。
3. 加入200µl 支原体去除剂，混匀。
4. 加入步骤（一、1）中准备好的细胞悬液2ml，混匀。此时总体积为5ml，细胞数约为1-10万。
5. 正常培养细胞至细胞密度达到80-90% (通常需要5-8天)，将细胞进行传代培养。
注：培养期间需要密切观察细胞的状态，如果发现细胞有明显的损伤，应通过更换或者稀释培养液来终止支原体清除作用；如果细胞生长比较缓慢，培养5-8天后细胞密度达不到80-90%的传代标准，也可以将细胞消化后加入标准培养液、转入新的培养皿继续培养。
二、对悬浮细胞支原体的去除
1. 支原体污染细胞的准备：细胞计数，用含有10%胎牛血清的标准培养液将细胞密度调整为6000-60000个/ml，备用。
2. 在15ml无菌离心管中加入1.6ml含有0.125%胰酶、5mM EDTA的PBS。可以使F12129胰酶细胞消化液(0.25%胰酶, 含酚红)用PBS稀释1倍后使用，EDTA需要额外补加至最终浓度为5mM。
3. 加入200µl 支原体去除试剂，混匀。
4. 加入步骤（二、1）中准备好的细胞悬液1.6ml。此时总体积为3.4ml，细胞数约为1-10万。
5. 37℃，摇床上缓慢摇动孵育30分钟。注：对于支原体去除试剂敏感的细胞，可以调整支原体去除试剂的作用时间为15到20分钟。
6. 600×g离心10分钟，去上清。
7. 加入含有10%胎牛血清的标准培养液重悬细胞，转入培养皿或者培养瓶进行正常培养。
(选做)为更加彻底地杀除支原体，继步骤（二、6）后也可以按照如下步骤用支原体去除试剂进一步处理。
8. 用5ml含有5%胎牛血清的标准培养液重悬细胞。
9. 加入150µl 支原体去除试剂，混匀。
10. 加入至6cm无菌培养皿中，正常培养3天。
11. 将培养液更换成含有10%胎牛血清的标准培养液，继续正常培养。
三、对无包膜病毒支原体的去除
1. 在1.5ml无菌离心管中加入1ml无血清的标准培养基。
2. 加入100µl支原体去除试剂，混匀。
3. 加入125µl病毒溶液(病毒溶液中的胎牛血清浓度≤8%)，轻轻涡旋混匀。此时“病毒-支原体去除试剂混合物”体积约为1.2ml。
4. 室温孵育2小时。
5. 使用细胞培养液对“病毒-支原体去除试剂混合物”进行10倍稀释以终止支原体去除试剂的作用，如1.2ml“病毒-支原体去除试剂混合物”中加入10.8ml细胞培养液；也可以直接将“病毒-支原体去除试剂混合物”加入待感染的细胞中进行细胞感染，只需最终总培养液体积是“病毒-支原体去除试剂混合物”的10倍即可。
注：在“病毒-支原体去除试剂混合物”的涡旋混匀过程中，确保混合物充分润湿了离心管的整个内表面，避免局部有支原体污染区域没有被处理到。
四、对包膜病毒支原体的去除
1. 在15ml无菌离心管中加入4.4ml无血清的标准培养基。
2. 加入100µl 支原体去除试剂，混匀。
3. 加入500µl病毒溶液(病毒溶液中的胎牛血清浓度≤8%)，轻轻涡旋混匀。此时“病毒-支原体去除试剂混合物”体积为5ml。
4. 室温孵育30分钟。
5. 使用细胞培养液对“病毒-支原体去除试剂混合物”进行10倍稀释以终止支原体去除试剂的作用，如1ml“病毒-支原体去除试剂混合物”中加入9ml细胞培养液；也可以直接将“病毒-支原体去除试剂混合物”加入待感染的细胞中进行细胞感染，只需要最终总培养液体积是“病毒-支原体去除试剂混合物”的10倍即可。
注1：在“病毒-支原体去除试剂混合物”的涡旋混匀过程中，确保混合物充分润湿了离心管的整个内表面，避免局部有支原体污染区域没有被处理到。
注2：本病毒溶液中支原体的去除过程，可多次用于病毒收获液中的支原体去除，以确保支原体已完全去除。
五、对其它支原体污染的试剂的处理
处理方式同“对无包膜病毒支原体的去除”。

1. 尽管支原体去除试剂可以彻底去除支原体，但仍可能由于清除不彻底、后续操作、使用试剂的污染及环境等因素造成再次污染，所以建议细胞培养期间，每周进行一次支原体检测，冻存细胞复苏后也尽快进行支原体检测。

2.细胞浓度是影响清除支原体效果的重要因素，对6cm培养皿，必须严格控制细胞量在1-10万之间。

3. 在使用支原体去除试剂消除支原体前，须确保培养液中的细胞为单个细胞，不能成团。支原体去除试剂是通过生物物理的方法与支原体膜结合来杀灭支原体的，因此必须直接接触支原体才能有效杀除，细胞成团容易造成细胞间隙、成为支原体的藏身之所，从而影响消除支原体的效果。可以通过延长胰酶的消化时间来避免细胞成团。

4. 细胞培养液中脂肪和蛋白质的浓度会影响支原体去除试剂消除支原体的效果，胎牛血清中含有胆固醇和其它支原体去除试剂的靶分子可能会阻止支原体去除试剂与支原体膜的结合，高浓度的胎牛血清会严重影响支原体去除试剂消除支原体的效果。在清除污染细胞中的支原体时，细胞培养液中胎牛血清的最佳浓度为5%。

5. 细胞应直接加入支原体去除试剂与培养液或者PBS的混合液中，以使细胞充分悬浮，防止吹打细胞时造成的气溶胶粘附于培养皿或者离心管的表面，妨碍支原体去除试剂与细胞的充分作用，从而影响支原体清除效果。

6. 当支原体去除试剂的作用时间为数天时(细胞增殖一代的时间)，期间应密切观察细胞的状态。必要时可更换成标准培养液，或将含有支原体去除试剂的培养液用标准培养液5倍稀释后继续培养。支原体去除试剂作用期间对细胞有一定的毒性，可以同时设置无支原体去除试剂作用的对照，对照组细胞长满后即可同时传代。

7. 经支原体去除试剂消除支原体后的细胞可能仍能检测出支原体的存在。一方面，支原体去除试剂消除支原体的过程中支原体膜溶解，支原体的DNA会释放存在于培养液中，引起支原体核酸检测呈假阳性，随着细胞的继续培养、细胞外的DNA会慢慢被水解，建议经支原体去除试剂杀除后的细胞在继续正常传代培养3到4代后再进行支原体检测；另一方面，支原体去除试剂的去除功效会受细胞密度、细胞状态等很多因素的影响，第一次去除时可能不能完全消除，甚至会因为操作等不当造成细胞的再次污染，此时可以待细胞状态稳定后进行第二次去除。

8. 进行病毒支原体去除前，首先要检测待感染的宿主细胞系是否有支原体污染，确保所用的宿主细胞无支原体污染。

9. 包膜病毒(Enveloped viruses)外层的脂质膜成分与支原体膜相似，也是支原体去除试剂结合的对象，根据使用支原体去除试剂的浓度和作用时间，这些病毒也极易被支原体去除试剂去除，为了能够彻底去除支原体同时保证病毒的感染能力，起始病毒滴度应高于10⁶ TCID50 (50% Tissue Culture Infectious Dose)。而对于无包膜病毒(Non-enveloped viruses)支原体的去除，病毒的滴度不会影响去除效果。

10. 本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床诊断或治疗，食品及化妆品等用途。请勿存放于普通住宅区。

11. 为了您的安全和健康，请穿好实验服并佩戴一次性手套和口罩操作。

12. 实验结果可由多种因素影响，相关处理只限于产品本身，不涉及其他赔偿。 

备注：由于产品信息可能会有优化升级。请以实际收货标签信息为准。

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